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人海马区血管构筑及鼠海马缺血再灌注损伤抗氧化治疗的实验研究 目的 研究人海马微动脉特征、微血管构筑特点,为海马缺血性疾病提供预防和诊治的实验依据。探讨人海马区(海马前区、海马内侧、海马后区、海马头、体、尾)血供形态学特点,为海马区血管介入治疗或外科手术的入路提供理论依据。Thioredoxin是具有还原活性的小分子蛋白,探讨Thioredoxin对鼠海马缺血再灌注损伤的抗氧化治疗作用。 方法 1.以墨汁甲醛混合液,经颈总动脉灌注新鲜尸体,直至全身皮肤、眼结膜黑染。静置三天,取脑,外固定七天。切去小脑、端脑,沿脉络裂小心切除间脑及脑干,保护好海马及其血管。在颞中平面,冠状切取3mm厚两块组织,石蜡包埋,制作150μm连续切片,HE染色,光镜下观察微血管构筑特点,图像分析仪测微及统计学处理数据。 2.以甲基丙烯酸甲酯,经颈总动脉灌注新鲜尸头,浓盐酸腐蚀,蒸馏水冲洗,扫描电镜观察人海马微动脉系统特点并测微。 3.对14具用福尔马林灌注固定的成人尸体进行红色乳胶颈总动脉灌注,常规取脑,在6~20倍手术显微镜下,清除海马区蛛网膜、静脉及其属支,保护显示动脉,追踪动脉来源、分布,以游标卡尺(0.02mm)测量动脉起端外经。 4.8周龄BALB/c雄性小鼠随机分成4组,即对照组5只,假手术对照组5只,手术对照组6只,手术治疗组6只。手术组动物,双侧颈动脉夹闭15分钟后再灌流,经颈动脉给与手术治疗组10μg Thioredoxin/只,手术对照组则给与等体积生理盐水溶液。动物存活24小时。连续冠状脑切片,测定海马缺血梗塞体积。Western Blotting分析海马内蛋白氧化量。Real-time RT-PCR分析海马内c-Fos mRNA表达量。结果 1.光镜下观察,墨汁甲醛混合液灌注的海马切片,图像分析仪测微并处理数据。发现海马齿状回的微血管与海马齿状回的细胞构筑层次相适应,分深浅两层。浅层滋养海马齿状回神经元顶树突,与分子层相当。深层滋养海马齿状回神经元胞体与锥体细胞层或颗粒细胞层相当。我们观察到海马穿动脉进人海马齿状回后,成树枝样分支,并与海马齿状回神经功能柱的形态相适应,进人并滋养神经柱,组成海马齿状回血管神经柱。对齿状回、海马CAZ、CAI区的微血管密度进行了图像分析和统计学数据处理,我们发现,齿状回神经功能柱的深层血管密度最大为,0.365士0. 018林才/林mz,CAI区的深层血管密度较小为,0.246土0.017脚2/林扩。 2.海马微血管铸型腐蚀标本,扫描电镜观察,海马微动脉包括海马的穿动脉、毛细血管前微动脉、中间微动脉和后微动脉;它们的外径分别是:200一60林m,80一30林m,30一20林m,20一10协m。它们的铸型标本在扫描电镜下分别可见环形、串珠样和竹节样平滑肌压迹。 3.海马前区一前穿质区有来自大脑前动脉、大脑中动脉及脉络膜前动脉的近中段的中央穿支,共7一12条,口径为0.51一0.77Inm,与杏仁体、海马头紧密相邻,集中成排地钻人脑实质。 海马内侧一颖叶与脑干间空隙内有大脑后动脉及其分支:丘体动脉、脉络膜后内动脉、脉络膜后外动脉和丘脑膝状体动脉。它们走行、较长,口径较粗,内侧环绕脑干,外侧贴邻下托、齿状回和海马。 海马后区一四叠体区有丘体动脉、脉络膜后内动脉的3一6条终支,口径为0.31一0.42~;配布在上下丘和松果体外缘,与海马尾密切相邻。 海马本部(海马头、体、尾)血液供给。本实验研究的28个脑半球中,共有130条动脉供给海马。平均每个海马有4.64土0.73(3一6)条,每条平均口径为0.46士0.13(0.28一0.90)llnn。海马的血供是多源的,主要来自脉络膜前动脉和大脑后动脉及其分支,它们的出现频率和口径见附表。 海马头动脉供给本研究发现28个海马头共有52条动脉供血。其中21条来自脉络膜前动脉,巧条来自大脑后动脉,16条来自颜下前动脉。平均每个海马头有1 .86土0.45(1一3)条动脉供血,每条动脉口径为0.44士0.12(0 .30一0.80)nun。 脉络膜前动脉在海马旁回钩的半环沟〔’}内分出海马动脉,经钩切迹in-cisura皿ci(海马沟前端)深人海马沟内,由腹内侧走向背外侧,滋养海马头和齿状回尾。大脑后动脉或颖下前动脉分出的海马动脉在钩的后方游离端钻人深处,沿着齿状回尾由背外侧走向腹内侧,与脉络膜前动脉的海马头支吻合成环,再发出细支滋养海马头和齿状回尾。 附表28例脑半球海马动脉起源、频率及口径海马动脉来源海马动脉条数 (%)海马动脉直径(见土:,~)脉络膜前动脉大脑后动脉颖下前动脉颜下中动脉颖下后动脉颖下总动脉顶枕动脉距状沟动脉脉络膜后外动脉含海马动脉脑半球数(%) 21(75 .00) 17(60 .71) 20(7 1 .42)3(10.71)8(28 .57) 2(7 .14)18(64 .28) 1(3 .57)7(25 .00)21(16.15)30(23 .08)24(18.46)4(3 .08)14(10.77) 4(3 .08)18(13.85) l(O,76)14(10.77)0 .41土0.14(0.30一0.80)0 .49土0.16(0.30一0.90)0 .48土0.12(