论文部分内容阅读
研究目的: 探索益气祛风、宣痹化饮方能否通过干预TLR9/AP-1信号通路中AP-1的含量及其下游白细胞介素因子来达到治疗过敏性鼻炎-哮喘综合征的作用机制。 研究方法: 采用“鸡卵清白蛋白(OVA)联合氢氧化铝凝胶腹腔注射+OVA雾化吸入激发”和“OVA滴鼻法”的形式建立豚鼠过敏性鼻炎-哮喘综合征模型，随机分为药物干预组4组和模型组，并设立空白对照组。药物干预组中，益气祛风、宣痹化饮方分为高剂量组、中剂量组、低剂量组，西药组用地塞米松进行干预，干预2周后，处死豚鼠，留取豚鼠血清、肺组织及鼻粘膜组织和支气管肺泡灌洗液以检测:1、肺组织和鼻粘膜组织HE染色切片;2、运用Giemsa染色观察肺组织及支气管肺泡灌洗液中嗜酸性粒细胞浸润情况;3、Western Blotting检测肺组织匀浆液C-Jun、C-Fos、IL-4、IL-5、IL-13的表达;4、PCR检测C-Jun、C-Fos的基因表达情况;5、Elisa法检测血清中IL-4、IL-5、IL-13的含量。 研究结果: 3.1 HE染色 鼻粘膜:模型组可见上皮细胞破坏变性，纤毛坏死脱落，黏膜下层可见炎细胞浸润;中药高剂量组、中剂量组、低剂量组及地塞米松组可见鼻粘膜上皮细胞及纤毛不同程度被破坏及脱落。空白对照组，上皮细胞及纤毛良好，未见明显炎细胞浸润。 肺组织:模型组可见支气管肺泡破坏，支气管壁明显增厚，并伴有渗出，支气管黏膜下层和肌层、肺间质可见大量嗜酸性粒细胞、淋巴细胞等炎细胞浸润;中药高剂量组、中剂量组、低剂量组及地塞米松组肺组织可见不同程度的支气管壁增厚及渗出，支气管黏膜下层和肌层、肺间质可见不同程度的嗜酸性粒细胞、淋巴细胞等炎细胞浸润。 3.2 Giemsa染色 BALF:模型组可见大量嗜酸性粒细胞浸润，中药高剂量组、中剂量组、低剂量组及地塞米松组肺组织可见不同程度的嗜酸性粒细胞浸润。模型组可见大量嗜酸性粒细胞;中药高剂量组、中剂量组、低剂量组及地塞米松组肺组织可见不同程度的嗜酸性粒细胞存在。空白组肺组织及支气管肺泡灌洗未见明显异常。 3.3 ELISA检测IL-4、IL-5、II-13 IL-4:药物干预组与模型组比有明显差异(P＜0.01);中药低剂量组与地塞米松组比较存在差异(P＜0.05)，而中药三组之间未见差异(P＞0.05);中药中剂量组与中药高剂量组和地塞米松组比较未见差异(P＞0.05)。IL-5:药物干预组与模型组比均明显差异(P＜0.01);中药低剂量组与地塞米松组比较存在差异(P＜0.05)，而中药三组之间未见差异(P＞0.05);中药中剂量组与中药高剂量组和地塞米松组比较未见差异(P＞0.05)。IL-13:四组治疗组与模型组比起来均有明显差异(P＜0.01)，而在治疗组四组比较中，中药低剂量组与其余三组存在差异，其中与中药中剂量组比较存在差异(P＜0.05)，与中药高剂量组和地塞米松组比较存在明显差异(P＜0.01);中药中剂量组与中药高剂量组比较无明显差异(P＞0.05)，而与地塞米松组比较存在明显差异(P＜0.01);中药高剂量组和地塞米松组比较无差异。 3.4 Western Blotting检测C-Jun、C-Fos、IL-4、IL-5、IL-13 在C-Fos、C-Fos组中，药物干预组较模型组存在显著差异(P＜0.01);地塞米松组与中药高、中、低三组之间比较均未见明显差异。在IL-4组中，中药低剂量组与模型组之间未见明显差异;模型组与中药高剂量组、中药高剂量组与地塞米松组存在有显著差异(P＜0.01);中药高剂量组与中药中剂量组、地塞米松组未见明显差异(P＞0.05)。在IL-5组中，地塞米松组与中药高剂量组之间未见明显差异(P＞0.05);与中药中剂量、低剂量组有显著差异(P＜0.01);中药中剂量组、低剂量组两者未见差异(P＞0.05);与中药高剂量组有显著差异(P＜0.01);中药低剂量组与中药高剂量组存在显著差异(P＜0.01)。在IL-13组中，模型组与药物治疗四组有显著差异(P＜0.01);中药低剂量组与中药中剂量组存在差异(P＜0.05)，与中药高剂量组及地塞米松组存在显著差异(P＜0.01);中药中剂量组与中药高剂量组及地塞米松组未见明显差异(P＞0.05)。 3.5 PCR检测C-Jun、C-Fos基因表达 C-Fos组中，中药组及地塞米松组与模型组均有明显差异(P＜0.01)。中药低剂量组与中药高剂量组、中药中剂量组及地塞米松组存在差异(P＜0.05);中药中剂量组、中药高剂量组及地塞米松组无明显差异。 C-Jun组中，中药组及地塞米松组与模型组均有明显差异(P＜0.01)。中药低剂量组与中药高剂量组及地塞米松组存在明显差异(P＜0.01);与中药中剂量组未见明显差异;中药中剂量组与中药高剂量组未见明显差异，与地塞米松组存在明显差异(P＜0.01);中药高剂量组与地塞米松组未见差异。 研究结论: 益气祛风、宣痹化饮方能够抑制AP-1构成因子即C-Jun、C-Fos的基因表达，抑制AP-1的总量，进而进一步抑制AP-1下游的IL-4、IL-5、IL-13的产生。且益气祛风、宣痹化饮方能够改善过敏性鼻炎-哮喘综合征豚鼠模型的症状及肺部病理和鼻粘膜病理，抑制嗜酸性粒细胞聚集等。同时，益气祛风、宣痹化饮方存在疗效关系，即高剂量中药较之低剂量中药，更有利于病理地改善、炎症因子地控制和基因地低表达、蛋白量地减少。