中华绒螯蟹蜕皮抑制激素(MIH)基因的原核表达及其分泌特征的研究

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中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)是我国重要经济蟹类之一,具有较高的营养价值,然而在养殖过程中,常出现一龄蟹因蜕皮未遂而成僵蟹现象,给生产带来巨大损失。研究表明,蜕皮抑制激素在中华绒螯蟹蜕皮过程中起着重要作用。中华绒螯蟹蜕皮抑制激素属于甲壳动物高血糖激素家族(CHH)神经肽,与蜕皮激素(molt hormone,MH)共同调节着中华绒螯蟹的蜕皮过程。MIH由中华绒螯蟹X-器官合成分泌,其成熟肽包括75个氨基酸残基,本实验利用分子生物学技术获得了MIH成熟肽基因序列,并成功构建了表达载体pET-30a-MIH,将其转入表达菌株Rosetta中进行诱导表达,经纯化后获得的融合表达蛋白用于多克隆抗体的制备,成功制备出了效价高、特异性强的多克隆抗体。制备出的多克隆抗体用于MIH在中华绒螯蟹视上神经节的免疫组织化学研究,免疫组织化学结果表明眼柄神经分泌细胞中细胞类型1、2、3、4都参与了MIH的分泌,并且窦腺也呈现阳性反应。通过体外注射MIH抗体,在2h、4h、6h、8h、12h、24h后检测中华绒螯蟹体内蜕皮激素的含量,我们发现在4h、6h时其体内蜕皮激素含量明显高于对照组,在12h后实验组与对照组蜕皮激素含量相当,无显著差异,此结果为将来进一步研究其作用机制奠定基础。
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