论文部分内容阅读
目的:观察乳腺小叶增生筛选方外用对乳腺增生病模型大鼠乳腺组织形态、病理及动情间期性激素及其受体的影响。方法:60只雌性未孕SD大鼠随机分为空白对照组、模型组、治疗组各20只。每组大鼠自适应性饲养的第一天起直至治疗后的第十五天里,每日9am、4pm通过观察其阴道涂片,记录大鼠动情周期,确定动情间期。造模阶段,空白对照组予生理盐水肌肉注射大鼠后肢外侧连续25d,模型组及治疗组于大鼠后肢外侧肌肉注射苯甲酸雌二醇20d序贯黄体酮5d复制大鼠乳腺增生病模型。治疗阶段,空白对照组与模型组予淀粉糊精贴敷于大鼠第三对乳房上,治疗组予乳腺小叶增生筛选方药糊贴敷于大鼠第三对乳房上。治疗第五天时,取每组大鼠的第三对右侧乳房,切口进行缝合,大鼠继续饲养;治疗第十天时,取每组大鼠的第三对左侧乳房,切口进行缝合,大鼠继续饲养,获得标本后进行石蜡切片,HE染色进行病理学诊断,观察乳腺腺泡面积和导管直径、各组大鼠乳腺病理组织形态变化。分别在造模前、造模后、治疗5天后及治疗10天后时,测量大鼠乳头直径、并在监测到的动情间期进行内眦静脉取血,通过酶联免疫分析法检测大鼠性激素水平（E2、P和PRL）、免疫组织化学法检测大鼠性激素受体（ER、PR）。结果:（1）乳头直径:造模前,三组大鼠乳头直径比较差异无统计学意义（P=0.2053）。造模后,与对照组相比,模型组和治疗组乳头直径增大（P<0.0001;P=0.0013）。治疗5天后,与对照组相比,模型组大鼠乳头仍然增大（P<0.0001）,但治疗组大鼠乳头直径比模型组缩小（P=0.0004）。治疗10天后,与对照组相比,模型组大鼠乳头仍然增大（P=0.0008）,但治疗组大鼠乳头直径进一步缩小（P=0.0002）,恢复至对照组大鼠乳头水平（P=0.236）。（2）动情周期持续时间:造模前适应性饲养阶段,三组大鼠动情周期持续时间无显著性差异（P=0.872）。造模阶段,与对照组相比,模型组和治疗组动情周期持续时间显著延长（P<0.0001;P<0.0001）。治疗阶段,与对照组相比,模型组大鼠动情周期时间仍然延长（P<0.0001）;但治疗组大鼠的动情周期时间比模型组缩短（P<0.001）。（3）动情周期各阶段持续时间:适应性饲养阶段,三组大鼠动情周期各阶段持续时间无显著性差异（P>0.05）。造模阶段,与对照组相比,模型组和治疗组动情周期各阶段时间均显著延长（P<0.05）。治疗阶段,与对照组相比,模型组大鼠动情前、动情期时间持续延长（P<0.05）,动情后、动情间期无显著性差异（P>0.05）;治疗组大鼠动情间期时间较模型组显著缩短（P<0.05）,动情前、动情期、动情后期时间无显著性差异（P>0.05）。（4）动情周期紊乱率:造模后,对照组仍有稳定的周期变化,但模型组出现2只大鼠动情间期消失,一直持续到治疗后仍未恢复;治疗组在造模后出现4只大鼠动情间期消失,治疗期间,仅发现1只大鼠动情间期消失,另外3只大鼠恢复正常的4个阶段。（5）各组大鼠造模前后及治疗后E2变化:造模前,三组大鼠E2水平无显著性差异（P=0.652）。造模后,与对照组相比,模型组和治疗组的E2水平升高（P=0.0002,P=0.0168）;治疗5天后,与对照组相比,模型组和治疗组的血清E2水平仍升高（P<0.0001,P=0.0355）,治疗组比模型组血清E2水平降低（P=0.0002）;治疗10天后,与对照组相比,模型组血清E2水平仍升高（P=0.0004）,治疗组恢复至对照组水平（P=0.7131）。（6）各组大鼠造模前后及治疗后P变化:各组P在造模前、造模后及治疗5天后、治疗10天后均无差异（P=0.5632,P=0.5369,P=0.3188,P=0.5346）。（7）各组大鼠造模前后及治疗后PRL变化:造模前,三组大鼠PRL水平无显著性差异（P=0.1451）。造模后,与对照组相比,用药组及治疗组的血清PRL水平升高（P=0.0037,P=0.0225）;治疗5天后,与对照组相比,模型组的血清PRL水平仍升高（P=0.0035）;治疗组已恢复至对照组水平（P=0.0577）;治疗10天后,各组见间的血清PRL水平无显著性差异。（8）实验结束后各组大鼠进行脏器指数比较:其中,与对照组比较,模型组与治疗组的肝脏指数均有统计学差异（P=0.0014,P<0.0001）,子宫指数无统计学差异（P=0.783,P=0.915）。（9）乳腺组织病理学:治疗5天后:对照组镜下可见乳腺组织处于静息状态,腺叶数量较少,腺叶内腺泡紧缩,上皮细胞排列较为整齐。模型组镜下可见腺上皮增生层次增加,腺泡与导管内可见分泌物,少数的腺泡存在轻度扩张,呈中度增生状态。治疗组镜下可见个别腺泡有轻度增生,腺泡与导管内见分泌物,未见明显扩张。治疗10天后:对照组镜下见乳腺处于静息状态,乳腺小叶散在分布,腺泡腔不扩张。模型组镜下可见乳腺小叶增生、体积仍增大,腺泡数量多,腺泡及导管内可见分泌物,部分腺泡和导管处于扩张状态。治疗组镜下可见乳腺小叶无明显增生,腺泡腔未见明显扩张。（10）乳腺腺泡面积:治疗5天后,与对照组相比,模型组和治疗组大鼠乳腺腺泡面积均较增大（P<0.0001、P<0.0001）,但治疗组的腺泡面积小于模型组（P=0.0038）;治疗10天后,与对照组相比,模型组和治疗组大鼠乳腺腺泡面积仍增大（P<0.0001、P=0.0014）,但治疗组的腺泡面积小于模型组（P=0.0058）。（11）乳腺导管内径:治疗5天后,与对照组相比,模型组和治疗组大鼠乳腺导管内径均增大（P<0.0001、P<0.0001）,但两组间无显著性差异（P=0.8610）;治疗10天后,与对照组相比,模型组和治疗组大鼠乳腺导管内径仍增大,（P<0.0005、P<0.0001）,但两组间无显著性差异（P=0.8674）。（12）免疫组化ER AS平均积分:治疗5天后,与对照组相比,模型组及治疗组的ER平均积分均升高（P<0.0001,P=0.0149）,且治疗组积分低于模型组（P=0.0007）;治疗10天后,与对照组相比,模型组的ER平均积分仍升高（P<0.0001）,治疗组恢复至对照组水平（P=0.2723）（P=0.2723）。（13）免疫组化PR AS平均积分:各组PR平均积分在治疗5天及10天后均无差异（P=0.1392,P=0.8795）。结论:通过雌二醇序贯黄体酮肌肉注射成功复制乳腺增生病大鼠模型。乳腺增生病大鼠表现为乳头直径增大,镜下见乳腺腺泡面积及导管内径增大,血清E2水平及PRL水平升高,ER表达更显著,动情周期持续时间延长,部分大鼠动情间期消失。撤除外源性性激素10天后,模型尚未复旧。外源性性激素对大鼠P及PR表达无显著影响。乳腺增生病的发生与机体内分泌激素水平紊乱有关,尤其与E2、PRL水平升高相关。外用乳腺小叶增生筛选方可加速乳腺增生病大鼠复旧,表现为乳头直径缩小,镜下见乳腺腺泡面积缩小,对导管内径无显著影响,延长的动情周期缩短,E2水平降低,ER表达降低。外用乳腺小叶增生筛选方可以通过降低血清E2、PRL水平、降低ER表达,减少雌激素对乳腺的刺激起到治疗作用,为药物在临床的应用提供实验依据。