Smurf1转录调控研究及MS9条件性敲除小鼠的构建

• 作 者: 林云青
• 机 构: 厦门大学
• 出 处: 厦门大学
• 发表日期: 2012年期
• 关键词: 报告基因 条件性敲除 Smurf1 转录调控 泛素连接酶

泛素—蛋白酶复合体系统是一类广泛存在于真核生物体体内的重要蛋白质降解系统,参与DNA损伤修复、细胞周期、细胞凋亡、细胞内吞、抗原呈递等几乎所有生物学过程。蛋白质的泛素化是一个高度有序且具有选择性的过程,由E1、E2、E3、泛素及底物蛋白参与,E3决定了泛素化修饰过程的特异性。　　
Smurf1(Smad ubiquitination regulatory factor1)是HECT E3泛素连接酶Nedd4家族中的主要成员,主要通过与Smad1、Smad5发生作用,对TGF-β/BMP信号通路进行调控。除了Smads,其他方面的研究还发现TGF-β受体、小G蛋白RhoA、骨特异性转录因子Runx2以及磷酸化形式的MEKK2等也可被Smurf1泛素化降解。越来越多的研究表明Smurf1在癌症发生、病灶转移、骨形成等方面均起着重要的调节作用,因此以Smurf1作为靶点蛋白来进行药物筛选受到了越来越广泛的重视。但是,Smurf1的体内活性调控机制依然尚未阐明。　　
为了探索Smurf1的转录调节机制,我们对Smurf1上游序列进行了克隆,构建了Smurf1基因报告系统,从中我们确定了上游序列里对下游基因表达影响较大的几个区域;随后我们检测了TNF-α、TGF-β/BMP激活、敲低RhoA等条件对Smurf1转录的影响,发现他们之间并没有明显的联系。　　
之前的研究表明MS9可能与Smurf1发生相互作用,为了进一步考察MS9的生理学功能,我们进行了MS9条件性敲除小鼠的构建。本文里我们完成了条件性敲除质粒的构建和ES细胞的筛选。