论文部分内容阅读
粘膜免疫往往需要佐剂来获得最佳的免疫效果，本研究通过观察粘膜佐剂大肠杆菌不耐热肠毒素(Escherichia coli heat-labile enterotoxin，LT)的无毒突变体mLT63和CpG-ODNl826经鼻内、直肠和阴道途径给予后帮助靶抗原在血清、致敏部位和近、远端粘膜组织中的抗体产生情况，来分析两佐剂在上述三个免疫途径对靶抗原的效果；初步研究将枯草芽孢杆菌作为B族链球菌(Group BStreptococcus，GBS)表面蛋白C5a肽酶功能活性基因片段的载体，为进一步研究其作为粘膜传递系统的效果奠定基础。
选用SPF级、雌性、6-8周的BALB/C小鼠，以牛血清白蛋白(bovine serumalbumin，BSA)和破伤风类毒素(tetanus toxoid，TT)为抗原，将mLT63和CpG-ODN1826分别经鼻内、直肠和阴道途径免疫动物，采用ELISA法检测免疫小鼠血清和肺、直肠、阴道粘膜组织萃取液的特异性IgA、IgG抗体水平。结果：①mLT63和ICpG-ODNl826对BSA、TT在鼻内、直肠、阴道免疫后血清特异性IgG的产生均有明显促进作用，与对照组相比有显著性差异(p<0.01)。②mLT63、CpG-ODN1826能够帮助BSA、TT在鼻内免疫后的肺组织、直肠免疫后的直肠组织提高所诱导的特异性IgA抗体滴度，与对照组相比有显著性意义(p<0.01)；mlX63、CpG-ODNl826的鼻内免疫显著增强了TT在直肠和阴道组织的特异性IgA抗体滴度，与对照组相比有显著性意义(p<0.01)；mLT63、CpG-ODN1826的直肠免疫则显著增强了BSA在肺和阴道组织的特异性IgA抗体滴度，与对照组相比有显著性差异(p<0.05)。③mLT63和CpG-ODN1826的联用对BSA和TT在组织中特异性IgG和IgA滴度与单独使用组相比无显著性差异(p>0.05)。④不同剂量的mLT63鼻内免疫对BSA在致敏部位和远端粘膜组织产生的特异性IgA比较中，只在肺组织获得了明显高于对照组水平的特异性IgA，各剂量组之间IgA水平的比较无统计学差异(p>0.05)。枯草芽孢杆菌作为GBS表面蛋白C5a肽酶功能活性片段的载体的研究。设计C5a肽酶的F1、FE片段引物，PCR扩增成功后以NheI和BamHI双酶切、然后成功重组到了含有枯草芽孢杆菌表面蛋白CotB、CotC基因的pDL质粒中，为下一步重组基因的表达奠定基础。
结论:
1．mLT63和CpG-ODNl826是两种能在鼻内、直肠、阴道途径有效提高靶抗原在血清特异性IgG和致敏部位及近端粘膜组织特异性IgA抗体水平的佐剂。
2．mLT63或CpG-ODN1826和BSA的阴道免疫后在直肠、mLT63或CpG-ODN1826和TT的鼻内免疫在直肠和阴道等远端粘膜组织可以诱导产生较高滴度的特异性IgA。
3．mLT63和CpG-ODN1826在鼻内、直肠和阴道途径的联合免疫不产生协同效应。
4．mLT63在鼻内免疫时无论在致敏部位近端还是远端粘膜组织，其特异性IgA的产生不存在剂量依赖效应。
5．成功扩增了C5a肽酶的F1、FE片段，并重组到包含CotB、CotC基因的质粒中，为下一步重组基因的表达、免疫奠定基础。