【摘 要】
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目的：在近年基础免疫学研究进展的启发下,本课题选择新近发现的活化T细胞的表面标记IL-18受体(IL-18R)为靶点,构建重组免疫毒素IL-18-PE38的表达质粒,并通过基因治疗技术将其
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目的：在近年基础免疫学研究进展的启发下,本课题选择新近发现的活化T细胞的表面标记IL-18受体(IL-18R)为靶点,构建重组免疫毒素IL-18-PE38的表达质粒,并通过基因治疗技术将其接种于EAE模型鼠体内,观察实验动物EAE症状及体征的改善情况以及相关细胞因子的动态变化来评价其治疗效果,并探讨其抗自身免疫性疾病的作用机理.方法:(1)采用RT-PCR法从小鼠肝总RNA中扩增mIL-18目的基因片段,将其连接到含PE38的原核表达载体上,构建成重组质粒PRKL-IL18-PE38,经酶切鉴定及测序确认后,转化大肠杆菌BL21,通过Western-blot测定重组蛋白的表达.(2)将mIL-18与PE38融合基因定向克隆入真核表达载体pSecTag2B,构建重组质粒pSecTag2B-IL18-PE38.经鉴定确认后,用脂质体包裹纯化的重组表达质粒,体外转染NIH3T3细胞株,通过免疫荧光法检测重组蛋白的表达,并利用转染后细胞培养上清体外测定IL-18-PE38目的蛋白的生物活性.(3)首先通过免疫方法的调整与改进,建立非敏感品系C57BL/6小鼠的EAE模型,再利用基因治疗的方法分别将pSecTag2B-IL18-PE38裸质粒及纳米脂质体包裹质粒接种于EAE鼠体内,进行治疗试验.观察治疗后EAE模型鼠的临床症状、体征、相关细胞因子水平等指标,以评价疗效并探讨其可能的作用机理.
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