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Harpin蛋白是由革兰氏阴性植物病原细菌Hrp(hrp，hypersensitive response and pathogenity)基因簇中hrp基因编码的、性质和功能相似的一类蛋白质，富含甘氨酸，缺少半胱氨酸，对蛋白酶敏感，对热稳定，大多对寄主植物具有毒性，导致寄主发病，能在非寄主植物上引起过敏反应(hypersensitive response，HR)，增强植物抗旱性，诱导植物抗病、抗虫，还可以促进植物生长。
popW是本实验室从青枯劳尔氏菌(Ralstonia solanacearum)ZJ3721中鉴定出的编码一种新的harpin蛋白大小为1142bp的基因，其编码的PopW蛋白是一种新的harpin蛋白，它同以前报道的harpin类物质具有相同的性质：酸性，富含甘氨酸和丝氨酸，缺少半胱氨酸并且是一种耐热蛋白。通过对PopW蛋白原核表达条件的优化发现：随着IPTG浓度的增加，诱导表达的蛋白含量也会随之增加，当IPTG的浓度为0.03mM，诱导表达的蛋白含量最高，若继续增加IPTG的浓度，蛋白的表达量反而下降。但鉴于成本因素，而且0.01mM的诱导效果与0.03mM并无显著差异，因此在后续试验中均采用0.01mM作为IPTG诱导浓度。
有研究表明PopW能够诱导植物产生系统抗性，并且该抗性属于水杨酸介导的SARa本文用不同浓度的PopW蛋白喷雾处理烟草，24h后接种烟草花叶病毒(Tobacco Mosiac Virus，TMV)，结果显示PopW处理叶片上的枯斑数目显著少于对照叶片。2.5mg/L、25mg/L、250mg/L的PopW蛋白均有较好的诱抗效果，其诱导烟草抗TMV的效果分别达到36.24%、64.53%、85.39%，并且随浓度增加，叶片上枯斑数逐渐减少。同时浓度为2.5mg/L的PopW蛋白的持效性至少达8天。此外，在田间试验中发现浓度为2.5mg/L的PopW蛋白对番茄叶霉病和水稻稻曲病的防效分别为80.19%和86.84%，它除了具有诱导抗病性外还可以促进植物生长，提高作物的产量的作用。用PopW蛋白处理的辣椒，其产量为999.8kg/亩，较对照产量增加16.89%。
鉴于PopW蛋白的诱导抗病性功能，我们构建了popW的转基因烟草，以进一步研究其在烟草中的表达及抗病性植物效应。从青枯劳尔氏菌(Ralstonia solanacearum)ZJ3721中克隆popW基因，连接到用BamHⅠ和XbaⅠ双酶切后的转基因表达载体pBI121上，构建成重组转基因载体pBI121-popW。重组载体转化至大肠杆菌TOP10中，经测序验证后，通过冻融法将重组载体转化根癌土壤杆菌EHA105。经PCR和酶切验证后，挑选阳性克隆供转化烟草使用。
利用叶盘法转化烟草(Nicotiana tabacum.cv.Xanthi NN)，用卡那霉素抗性筛选再生植株。PCR扩增检测转基因烟草中的靶基因序列popW及35S启动子序列，结果显示外源基因已经整合到烟草基因组中，得到T0代转基因烟草，利用RT-PCR检测到popW在转基因烟草中能正常表达。
popW是本实验室从青枯劳尔氏菌(Ralstonia solanacearum)ZJ3721中鉴定出的编码一种新的harpin蛋白大小为1142bp的基因，其编码的PopW蛋白是一种新的harpin蛋白，它同以前报道的harpin类物质具有相同的性质：酸性，富含甘氨酸和丝氨酸，缺少半胱氨酸并且是一种耐热蛋白。通过对PopW蛋白原核表达条件的优化发现：随着IPTG浓度的增加，诱导表达的蛋白含量也会随之增加，当IPTG的浓度为0.03mM，诱导表达的蛋白含量最高，若继续增加IPTG的浓度，蛋白的表达量反而下降。但鉴于成本因素，而且0.01mM的诱导效果与0.03mM并无显著差异，因此在后续试验中均采用0.01mM作为IPTG诱导浓度。
有研究表明PopW能够诱导植物产生系统抗性，并且该抗性属于水杨酸介导的SARa本文用不同浓度的PopW蛋白喷雾处理烟草，24h后接种烟草花叶病毒(Tobacco Mosiac Virus，TMV)，结果显示PopW处理叶片上的枯斑数目显著少于对照叶片。2.5mg/L、25mg/L、250mg/L的PopW蛋白均有较好的诱抗效果，其诱导烟草抗TMV的效果分别达到36.24%、64.53%、85.39%，并且随浓度增加，叶片上枯斑数逐渐减少。同时浓度为2.5mg/L的PopW蛋白的持效性至少达8天。此外，在田间试验中发现浓度为2.5mg/L的PopW蛋白对番茄叶霉病和水稻稻曲病的防效分别为80.19%和86.84%，它除了具有诱导抗病性外还可以促进植物生长，提高作物的产量的作用。用PopW蛋白处理的辣椒，其产量为999.8kg/亩，较对照产量增加16.89%。
鉴于PopW蛋白的诱导抗病性功能，我们构建了popW的转基因烟草，以进一步研究其在烟草中的表达及抗病性植物效应。从青枯劳尔氏菌(Ralstonia solanacearum)ZJ3721中克隆popW基因，连接到用BamHⅠ和XbaⅠ双酶切后的转基因表达载体pBI121上，构建成重组转基因载体pBI121-popW。重组载体转化至大肠杆菌TOP10中，经测序验证后，通过冻融法将重组载体转化根癌土壤杆菌EHA105。经PCR和酶切验证后，挑选阳性克隆供转化烟草使用。
利用叶盘法转化烟草(Nicotiana tabacum.cv.Xanthi NN)，用卡那霉素抗性筛选再生植株。PCR扩增检测转基因烟草中的靶基因序列popW及35S启动子序列，结果显示外源基因已经整合到烟草基因组中，得到T0代转基因烟草，利用RT-PCR检测到popW在转基因烟草中能正常表达。