人胎盘抗凝蛋白变体的构建、分离纯化和体内外抗凝、抗栓性质研究

• 作 者: 杨翔
• 机 构: 南京大学
• 出 处: 南京大学
• 发表日期: 2004年期
• 关键词: 抗凝药物 人胎盘抗凝蛋白 融合蛋白 分离纯化 抗凝作用 抗栓作用

血栓形成是心血病疾病的主要发病机制之一，抗血小板及抗凝血对预防血栓形成及溶栓后再栓塞具有重要的临床意义。肝素作为最常用的抗凝药物，但其存在明显的出血副作用、对已凝聚的凝血酶活性作用有限、产生血小板减少症等不足之处，替代肝素的抗凝剂的研究逐渐成为此领域的研究热点。重组水蛭素和水蛭素衍生物的研究近年来异常活跃，早期的临床实验显示，水蛭素抗栓作用强大，但有较严重的出血并发症。
我们利用计算机工作站在人胎盘抗凝蛋白的C末端接上了水蛭素的C端并采用了不同的连接肽设计构建了三种融合蛋白分子，能量优化后与凝血酶分子进行了lns的分子动力学模拟，分析研究了他们各自与凝血酶的作用情况，从理论上比较了各融合蛋白的稳定性和生物活性，并与实验结果相对照。
我们利用蛋白质工程和基因工程技术，将水蛭素C末端与人胎盘抗凝蛋白变体连接在一起构建一类新的抗凝蛋白—人胎盘抗凝蛋白变体。人胎盘抗凝蛋白与活化血小板的磷脂表面特异性结合，如此增强了水蛭素的抗栓特异性，而且人胎盘抗凝蛋白本身也具有抗凝与抗栓作用，理论上这种新的蛋白有强大的抗血栓作用，而且降低出血并发症。
我们还进一步探索了新型抗凝蛋白质—人胎盘抗凝蛋白变体抗凝和抑制动脉血栓形成的效果。人胎盘抗凝蛋白变体是一种相对安全并且有效的抗凝和抗栓制剂，其抗凝作用在用药后15min时最强。人胎盘抗凝蛋白变体的抗凝作用弱于普通肝素，但抗栓能力强于普通肝素。其抗凝特异性和减少白细胞数目的机制需进一步研究，在临床上治疗血栓性疾病有广阔的发展前景。