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目的： 缺血预处理(Ischemic Preconditioning, IPC)是一种对缺血再灌注心肌的内源性保护机制，主要通过抑制心肌细胞凋亡减少心肌梗死面积。但IPC是否能够通过刺激细胞增殖，补充心肌细胞数量来修复受损心肌组织尚不明确。本研究通过建立大鼠缺血预处理模型，对细胞增殖指标Ki67进行检测，观察心肌细胞的增殖；通过检测特异心肌早期转录因子Nkx2.5、GATA4以及干细胞标记物c-Kit的表达水平，探究增殖细胞的来源。 方法： 1．动物模型建立。雄性健康Vista大鼠，8周龄(220±25g)，随机分为3组：假手术组(Sham)、缺血再灌注组(I/R)、缺血预处理组(IPC)。于术后1天、3天、7天、14天处死大鼠并取材，分别对相关指标进行检测。 2．心肌组织的形态学检测。HE染色法观察比较Sham、I/R和IPC组心肌组织的损伤程度。 3．细胞增殖指标Ki67的检测。采用免疫荧光双标染色法和免疫组织化学SABC法检测Ki67在处理组各时间点的表达情况，并镜下随机选取十个视野对阳性细胞数进行统计。 4．心肌组织中新生心肌细胞来源的指标分别用RT-PCR、western blot、免疫组织化学法检测。 (1)采用RT-PCR检测特异心肌早期转录因子Nkx2.5、GATA4以及干细胞特异标记物c-Kit的表达； (2)运用western blot检测GATA4以及干细胞特异标记物c-Kit的表达； (3)组织水平利用免疫组织化学SABC法检测GATA4、Nkx2.5的表达，免疫荧光双标染色法检测各时间点GATA4、Nkx2.5、c-Kit的表达，统计阳性细胞数。 结果： 1．模型的建立。缺血成功判定：结扎过程ST段抬高；恢复血液的再灌，ST段恢复至正常。 2．肌组织HE染色。对各组心肌组织行HE染色，于镜下进行观察，Sham组心肌病理改变不明显，肌纤维走行自然，排列整齐；I/R组心肌细胞明显膨大，部分细胞胞膜及细胞核发生溶解，排列紊乱、炎性细胞浸润显著，而IPC组病理改变明显减轻，肌纤维的排列相对整齐，细胞的肿胀减轻较明显，炎性细胞在组织内浸润减少。 3．心肌细胞增殖指标Ki67检测结果。 (1)免疫组织化学SABC法检测Ki67：Sham组的阳性细胞非常少，I/R组和IPC组的阳性细胞数在术后增多，但程度不同。与Sham组比较，术后各时间点IPC组阳性细胞显著增多具有统计学意义(P<0.01)。与I/R组比较，IPC组Ki67阳性细胞数在术后第三天和第七天具有统计学意义(P<0.01)。 (2)Ki67免疫荧光双标染色法检测检测结果：IPC组与Sham组比较，在术后第一天，第三天和第七天阳性细胞数差异显著(P<0.05)；术后第三天、第七天IPC组和I/R组比较也具有统计学意义(P<0.05)。 4．心肌组织中新生心肌细胞来源的检测结果 (1)mRNA水平检测c-Kit、Nkx2.5、GATA4的表达结果： 经RT-PCR检测，IPC组和I/R组，c-Kit、Nkx2.5和GATA-4的表达趋势相近，确定IPC组c-Kit表达量峰值在第三天， I/R组出现在第七天，且具有统计学意义(P<0.01)。 (2)蛋白水平检测c-Kit、GATA4的表达结果 Sham组c-Kit、GATA4有微量的表达。IPC和I/R组表达量均有显著增加。IPC与I/R组比较，二者表达水平于第一天，第三天和第七天比较有统计学意义(P<0.05)。 (3)组织水平检测Nkx2.5、GATA4的表达 免疫组织化学SABC法检测Nkx2.5、GATA4表达：对照组Nkx2.5、GATA4几乎没有阳性结果，IPC组和I/R组阳性单位增加，其在术后显著大于Sham组，IPC组在第一天，第三天和第七天与I/R组比较具有统计学意义(P<0.05)。 免疫荧光双标法检测c-Kit、Nkx2.5、GATA4（c-Kit分别与Nkx2.5、GATA4组合）：处理后各时间点Sham组两指标阳性单位均显著少于IPC组和I/R组(P<0.05)。组间比较，术后第一天，第三天和第七天阳性细胞数比较具有统计学意义，且IPC组的阳性细胞数在第三天达到峰值(P<0.05)。 结论： 1．IPC可有效减少心肌梗死面积，减轻心肌梗死病理学改变。 2．IPC可以增加细胞增殖特异性指标Ki67的表达，促进心肌细胞再生。 3．IPC及I/R使得Nkx2.5、GATA4、c-Kit阳性细胞数增加，但二者峰值出现时间不同，IPC组在第三天，I/R组在第七天，且IPC较I/R更能促进相关指标的阳性细胞数量增加。 4．步判断c-Kit阳性细胞可能作为新生心肌细胞的来源，分化为心肌细胞，参与受损心肌细胞的修复。