互花米草谷胱甘肽合成及还原酶相关基因的克隆和功能鉴定

来源 :烟台大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:BeThinking
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
盐胁迫是影响植物生长和发育的重要非生物胁迫因子,它能引起次级胁迫-渗透胁迫和氧化胁迫。植物在胁迫下可以利用抗氧化系统清除活性氧,从而保护细胞和亚细胞结构。近年来,研究者在盐生植物中鉴定了大量与耐盐相关的基因,并进行了功能验证。研究表明,谷胱甘肽还原酶GR作为抗氧化酶在植物耐盐机制中发挥了重要作用。  为研究泌盐盐生植物互花米草(Spartina alterniflora)谷胱甘肽合成酶相关基因(SaOAS)及还原酶相关基因(SaGRC、SaGRP)的功能,本研究首先分析了互花米草幼苗在600 mmol/L NaCl和500μmmol/L CdCl2胁迫下叶片中谷胱甘肽还原酶GR的活性变化;其次,克隆出谷胱甘肽还原酶基因SaGRC、SaGRP和半胱氨酸合成酶基因SaOAS,构建过量表达载体后利用农杆菌介导法转化拟南芥和水稻,并对获得的阳性纯合转基因拟南芥株系进行相关生理生化测定和耐盐性分析。实验结果如下:  (1)胁迫处理对谷胱甘肽含量和谷胱甘肽还原酶活性的影响  分别用600 mmol/L NaCl和500μmmol/L CdCl2处理互花米草幼苗,结果显示,随着处理时间的增加,还原性谷胱甘肽含量呈现上升趋势。与此同时,谷胱甘肽还原酶活性呈现上升趋势,与非变性的聚丙烯酰氨凝胶电泳显示的总体活性相一致。  (2)基因的克隆和序列分析  利用3’-RACE和5’-RACE技术获得目的基因SaGRC、SaGRP、SaOAS,其中SaGRC为胞质型,SaGRP为线粒体型,两者序列同源性很高。SaGRC基因的开放阅读框为1479 bp,推导其编码492个氨基酸残基,SaGRP基因的开放阅读框为1659 bp,推导其编码532个氨基酸残基。SaOAS基因的开放阅读框为969 bp,推导编码322个氨基酸残基。  (3)基因表达水平的变化  分别用600 mmol/L NaCl和500μmmol/L CdCl2处理互花米草幼苗,结果显示,SaGRC、SaGRP、SaOAS基因的表达量均呈现先上升后下降的趋势,推测GR在互花米草抗逆机制中发挥重要作用。  (4)转基因拟南芥生理检测  对筛选出的过量SaGRC、SaGRP、SaOAS拟南芥株系进行基因表达定量分析,最终分别选取了2个株系进行种子萌发、弯根实验,以及相关生理生化指标的测定。结果显示,在不同浓度的NaCl处理下,转基因拟南芥的种子萌发情况优于野生型拟南芥,转基因株系的丙二醛(MDA)、脯氨酸(Pro)、还原型谷胱甘肽(GSH)含量等指标显示,转基因株系的耐盐性比野生型拟南芥有所提高。  (5)转基因水稻抗性检测  通过植物组织培养法获得的过表水稻出愈率约为85.4%,分化率约为23.7%。  其中,对过量表达SaGRC基因的水稻T2代株系进行定量表达分析和初步表型鉴定,并选取了10个株系进行扩繁,有待得到纯合株系,再进行生理生化指标的测定。
其他文献
充分认识官僚主义的危害提高反对官僚主义的自觉性□省经贸委副主任翟秀英省委、省政府大张旗鼓地提出反对官僚主义,一方面反映了反对官僚主义是一项长期而艰巨的任务,另一方面
全国解放后,在取得抗美援朝、土地改革、镇压反革命三大运动胜利的基础上,党中央、毛泽东在1951年底又发动了反贪污、反浪费、反官僚主义的三反运动。这是我党执政后,自觉地抵制
在良好的公司治理结构中,大股东是关键一环,尤其是在“一股独大”、家族式经营的民营企业中,大股东的合规与否,很大程度上决定着上市公司经营的成败。全流通市场由于环境、条
随着新闻的大众化和受众对新闻接近性要求的不断提升,电视民生新闻应运而生并以其亲切活泼的新鲜面孔吸引了观众的眼球。民生新闻是以民本思想为基点,以平民视角和人文叙事手
在民国时期的海上画坛,周炼霞的高贵优雅、吴青霞的娟秀清丽、陆小曼的蕴藉风流闻名遐迩。新中国成立后,她们又都是首批上海中国画院画师,活跃在海上画坛。今天,三位昔日美女
农村党支部是党在农村全部工作和战斗力的基础,是农村各种组织和各项工作的领导核心。农村党支部建设的状况,将直接影响整个农村的稳定、脱贫致富奔小康和农业的现代化,进而影响
选拔与选举,是当前我们在提升使用干部中的两种基本方法.选拔主要有领导提名或上级任命,选举主要是由群众民主推举.有时两种方法也结合使用,在选举的基础上选拔,但通常还是以
黄独峰素以“写生妙手”盛名蜚声海内外。传承大师这一写生衣钵,是今日漓江画派的艺术自觉。五四前后,中国画坛面临前所未有的大变局。“中国画学至国朝而衰弊极也!岂止衰弊?
一、20年前的十一届三中全会,是建国以来党的历史上具有重大意义的一次会议,它标志着我国社会主义进入新时期的伟大历史转折的开端。这个日子离我们愈远,愈益显示其伟大深远的意义
辞去了高管的职位,丁焱开始了自己萌动的想法——创业。日本NHK电视台在正在授课,小河原智子在给观众讲授一堂“五官位置配置法”的似颜绘创作课。上海松江泗泾的西南名苑,一