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研究目的:甲状腺癌是内分泌系统最常见的恶性肿瘤,甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)又是甲状腺癌中最常见的病理类型。近年来,PTC的发病率在全球范围均呈现明显的上升趋势,成为人类生命健康的重要威胁之一。FKBP51(FK506 binding Protein 51,FKBP51)是分子量为 51 kDa的FK506结合蛋白,属于亲免素家族。临床上能够通过与FK506、雷帕霉素等免疫抑制剂结合,从而提高淋巴细胞对糖皮质激素的敏感性以及减少T淋巴细胞的活化来防止器官移植后的排斥反应以及治疗一些自身免疫性疾病。近年来,大量研究表明,FKBP51不仅参与体内正常的雄激素、孕激素等类固醇激素的调节,还在肿瘤的发生发展密中扮演重要角色,FKBP51表达量升高或降低在很多肿瘤中被相继发现,尤其是激素依赖性肿瘤,如前列腺癌。FKBP51与PTC相关研究未见报道,考虑到PTC的女性发病率远高于男性,可能与性激素有关,所以我们推测FKBP51可能在PTC的发生发展中发挥重要的生物学作用。本文旨在研究FKBP51蛋白在PTC中的表达情况和对细胞增殖、迁移、侵袭等生物学行为的影响及其分子机制,为PTC的诊断及预后提供新的分子标志物。研究方法:1.免疫组化:31例PTC组织和41例正常对照,行FKBP51免疫组化染色,分析癌组织和正常对照的FKBP51表达差异以及FKBP51的表达水平与TNM分期等临床病理特征的相关性。1.细胞转染:FKBP51过表达慢病毒GFP-FKBP5感染PTC细胞Kl,shRNA-FKBP51敲减质粒转染PTC细胞TPC-1,分别进行CCK8增殖实验和Transwell迁移和侵袭实验,观察FKBP51对PTC细胞生物学行为的影响。2.Western bloting:用 Western bloting 检测转染细胞 NF-κB(nuclear factor-kappa B)通路蛋白及EMT(epithelial-to-mesenchymal)相关蛋白的变化,对FKBP51的作用机制进行探究。3.抑制实验:PDTC抑制NF-κB通路,观察其对FKBP51过表达的K1细胞迁移和侵袭能力的影响以及EMT相关蛋白表达量的改变。4.细胞骨架荧光染色:用Tubulin-tracker Red对PTC细胞骨架tubulin进行染色,探究FKBP51是否通过影响细胞骨架的形成改变其迁移和侵袭能力。结果:1.FKBP51在PTC表达及与临床病理特征相关性分析:在组化分析结果显示FKBP51在PTC及癌旁组织中均有表达,但在癌组织中的表达显著高于癌旁组织(P<0.05),其表达量与年龄无关(P>0.05)。此外,FKBP51在PTC组织中的表达量高低与临床分期具有显著相关性(P<0.05),即FKBP51表达量越高,其分期越差。2.FKBP51对PTC生物学特征的影响:FKBP51过表达能显著促进Kl细胞系的迁移和侵袭能力,下调FKBP51表达能显著抑制TPC-1细胞系的迁移和侵袭(P<0.05),但对K1和TPC-1的增殖能力无显著影响(P<0.05)。3.FKBP51通过NFκB-EMT途径促进PTC迁移侵袭:进一步的研究显示FKBP51 能够激活 NF-κB 通路和 EMT(epithelial-to-mesenchymal)相关基因。NF-κB通路抑制剂PDTC能够抑制过表达FKBP51的Kl细胞的迁移和侵袭能力并改变EMT相关蛋白的表达水平。4.FKBP51对PTC细胞骨架tubulin无明显影响:红色荧光标记的抗tubulin抗体对细胞进行染色,与对照组相比,FKBP51过表达的K]细胞和FKBP51敲减的TPC-1细胞,无论从tubulin在胞浆中的分布还是荧光染色强度看,均无显著差异。结论:FKBP51在PTC中的表达量高于正常组织,其表达水平与临床分期正相关;FKBP51对PTC的增殖无明显影响,但能显著促进其迁移和侵袭,可能与NF-κB通路和EMT有关。