薏仁中多酚类化合物降尿酸活性及其作用机制研究

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薏仁是一种营养丰富均衡、药食兼用的谷物,其营养价值位列禾本科植物之首。目前对于薏仁的研究主要集中于简单的提取工艺研究及其提取物的抗氧化、抗炎、抑菌、抗病毒、降血糖、抗肿瘤、调节免疫等方面的活性评价。但对薏仁提取物预防、治疗高尿酸血症及痛风类疾病的研究较少。本研究旨在对精薏仁、糙薏仁、薏仁麸皮、薏仁壳中的游离型多酚和结合型多酚种类进行鉴定和含量测定,并评价其降尿酸活性,研究其作用机制,为以薏仁为原料开发具有降尿酸活性的保健食品提供理论基础和方法指导,同时为科学全面地利用薏仁资源提供依据。(1)通过有机溶剂酸提法提取精薏仁、糙薏仁、薏仁麸皮、薏仁壳中的游离型多酚,再采用碱式皂化法进一步对其中的结合型多酚进行提取;利用高效液相色谱法对游离型多酚和结合型多酚进行进行鉴定和含量检测。结果表明:精薏仁、糙薏仁、薏仁麸皮、薏仁壳中游离型多酚与结合型多酚的种类大致相同,均富含绿原酸、香豆酸和阿魏酸。总多酚含量从高到低依次为:薏仁麸皮(总多酚类物质、游离型多酚、结合型多酚含量分别为751±25、503±21、248±4 mg of gallic acid equiv/100 g of dry wt)>薏仁壳>糙薏仁>精薏仁。结合型多酚约占精薏仁和糙薏仁总多酚含量的12%左右。然而,结合型多酚约占薏仁麸皮和薏仁壳中总多酚含量的30%以上。(2)通过采用DPPH自由基清除法、氧化自由基吸收能力法(ORAC)、超氧阴离子自由基清除法对精薏仁、糙薏仁、薏仁麸皮、薏仁壳中的游离型多酚、结合型多酚、绿原酸、香豆酸和阿魏酸的抗氧化能力进行综合评价。三种抗氧化评价方法对精薏仁、糙薏仁、薏仁麸皮、薏仁壳中多酚提取物的抗氧化活性综合评价均为:薏仁麸皮>薏仁壳>糙薏仁>精薏仁。薏仁中多酚类化合物的抗氧化性从高到低依次为:绿原酸>香豆酸>阿魏酸。四种原料中游离型多酚的抗氧化活性高于结合型多酚。结合型多酚对总多酚抗氧化活性的贡献率约占25%。(3)通过黄嘌呤氧化酶(XOD)的体外抑制实验(体外降尿酸实验)评价精薏仁、糙薏仁、薏仁麸皮、薏仁壳中游离型多酚与结合型多酚、绿原酸、香豆酸、阿魏酸的降尿酸作用。实验表明:四种原料的多酚提取物均具有一定的体外降尿酸活性,四种原料多酚提取物体外降尿酸活性从高到低依次为:薏仁麸皮>薏仁壳>糙薏仁>精薏仁。薏仁麸皮的体外降尿酸活性最高,总多酚、游离型多酚、结合型多酚的体外降尿酸活性分别为908±46、607±32、301±15μg of allopurinol equiv/g。游离型多酚的体外降尿酸活性要高于结合型多酚。绿原酸、香豆酸、阿魏酸均具有一定的体外降尿酸活性。降尿酸活性强弱为:阿魏酸=香豆酸>绿原酸,阿魏酸、香豆酸的降尿酸活性约是绿原酸的100倍。氧嗪酸钾诱致高尿酸血症大鼠模型体内降尿酸实验表明,薏仁麸皮多酚提取物作为受试药物对氧嗪酸钾诱致高尿酸血症大鼠具有良好的降尿酸作用,可有效缓解或治疗大鼠的高尿酸血症;与此同时,既不会影响大鼠的体重变化,又具有较好的肾脏保护作用,毒副作用较小。(4)基于CLC Drug Discovery Workbench分子对接技术研究多酚类化合物体外降尿酸机制,结果表明:绿原酸的羧基O原子与XOD中GLU-1016形成一个氢键,羰基O原子和ASN-1073形成一个氢键;香豆酸羰基上的O原子分别与THR-909形成一个氢键、与ALA-910形成一个氢键;阿魏酸的羰基O原子分别与THR-909形成一个氢键、与ALA-910形成一个氢键,阿魏酸苯环上的甲氧基O原子与CYS-113形成一个氢键。多酚类化合物与XOD对接过程中的自由能评价结果为:别嘌呤醇<阿魏酸<香豆酸<绿原酸。多酚与XOD亲和力以及对XOD的抑制能力从高到低依次为:别嘌呤醇>阿魏酸>香豆酸>绿原酸,与体外降尿酸实验的评价结果相一致。利用CLC Drug Discovery Workbench分子对接技术对果蔬、谷物中常见多酚类化合物与XOD的相互作用评价结果表明,对接自由能从低到高依次为:咖啡酸<槲皮素<木犀草素<没食子酸<山奈酚<金丝桃苷。多酚与XOD亲和力以及对XOD的抑制能力从高到低依次为:咖啡酸>槲皮素>木犀草素>没食子酸>山奈酚>金丝桃苷,与体外降尿酸实验的结果吻合。
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