【摘 要】
：
中国小麦花叶病毒（Chinese wheat mosaic virus,CWMV）是土传小麦花叶病害的重要病原之一,其基因组含2条单链正义RNA（RNA1-2）。近年本实验室在大量前期工作的基础上成功构建了CWMV
论文部分内容阅读
中国小麦花叶病毒（Chinese wheat mosaic virus,CWMV）是土传小麦花叶病害的重要病原之一,其基因组含2条单链正义RNA（RNA1-2）。近年本实验室在大量前期工作的基础上成功构建了CWMV全长cDNA侵染性克隆。病毒诱导的基因沉默（VIGS）载体已成为研究植物基因功能的重要工具之一,利用VIGS载体已解析了包括转录因子、光合作用等过程相关基因的功能。为了研发CWMV VIGS载体,本文利用分子生物学方法对CWMV侵染性克隆进行了改造,并尝试将其应用于植物內源基因的沉默,主要取得了以下结果:1、在CWMV侵染性克隆突变体M5的基础上,我们重组构建ΔCWMV:00载体,即在CWMV外壳蛋白基因后引入一个多克隆位点（MCS）。侵染性分析显示ΔCWMV:00能够侵染本氏烟和小麦,并引起植株花叶、黄化等类似病毒侵染的症状。Northern blot结果表明ΔCWMV:00可在本氏烟和小麦叶片中积累,表现出良好的系统侵染活性。2、将本氏烟和小麦八氢番茄红素脱氢酶（PDS）基因的部分片段分别插入到多克隆位点处,构建了ΔCWMV:NbPDS300、ΔCWMV:TaPDS300载体。定量逆转录聚合酶链式反应（qRT-PCR）分析表明,与对照相比,內源NbPDS和TaPDS基因表达量下降65-75%;而且病毒诱导沉默的本氏烟和小麦植株均产生显著的光漂白现象。在ΔCWMV:00中分别插入长500-1500bp的PDS基因片段,测序和定量分析表明较长的插入片段可影响载体的稳定性和病毒诱导的基因沉默（VIGS）效率。3、构建了模拟本氏烟miR165/166和小麦miR3134a靶基因产物（target mimicry）的载体ΔCWMV:STTMmiR165/166和ΔCWMV:STTMmiR3134a。将二者分别接种本氏烟和小麦,定量分析显示,本氏烟miR165/166和小麦miR3134a的表达量降低,而二者的靶基因表达量则上调,表明CWMV VIGS载体可适用于內源miRNA的沉默。因此,CWMV VIGS载体的构建为单双子叶植物基因功能分析提供了有价值的工具。4、半胱氨酸蛋白酶是一类重要的蛋白酶家族,广泛参与植物的生理过程且与病毒侵染有关。为了进一步分析其功能,我们从本氏烟克隆了一个编码CysP的基因（NbCysP）并在大肠杆菌中进行了重组表达;重组表达的NbCysP融合蛋白经过亲和层析纯化,免疫兔子制备多克隆抗体,Western印迹分析显示该抗体能和重组NbCysP蛋白发生强烈的免疫学反应且条带单一,表明所获得的CysP抗体具有良好的特异性。进一步检测分析显示NbCysP在本氏烟植株中呈高水平表达且受低温抑制。酵母双杂分析发现NbCysP可与CWMV外壳蛋白互作,Pull-down等实验进一步验证了二者互作。这些结果表明NbCysP可能在CWMV侵染过程中发挥重要作用。
其他文献
语音增强的目的是从含噪语音中尽可能的恢复出干净语音,提升语音的感知质量和可懂度,从而使接收方收听更加舒适和准确。语音增强常使用短时傅里叶变换(STFT)将时域信号转换到频域中进行处理,然而人们通常仅关注频域中幅度信息而忽视了相位信息,这主要是因为相位卷绕(phase wrapping)导致相位谱非结构性分布,使之难以估计和重构。但近年来研究表明相位信息能够有效提高语音性能,因而对于相位信息的估计和
可溶液加工的单晶钙钛矿薄膜在载流子寿命方面优于其多晶对应物,因为较少的晶界导致载流子复合损失减少。而单晶钙钛矿纳米线是光电探测和其他光电应用的理想选择,因为它们的独特优势是可以通过自然形成的边界在纳米级别操纵光和载流子。尽管研究人员已经做出了很大的努力来生长用于光电检测的高质量单晶钙钛矿纳米线,但是它们的侧面是粗糙的,伴随着一定数量的缺陷,这恶化了暗电流,因此限制了弱光检测的能力。并且单晶钙钛矿(
与电子相比,光子作为信息载体具有能耗低,带宽大,传输速度快,保密性高等优点。因此,量子光子技术已经成为时代发展的迫切需求,而小型化和片上集成是量子光子技术的重要发展方向。像集成电路中的二极管一样,光学单向传输设备(Asymmetric Transmission Device,ATD)在量子信息处理和可扩展的纳米光子网络中起着重要的作用,因此ATD成为研究重点。目前研究者们已经提出了许多基于纳米光子
紫花苜蓿是一种多年生牧草,在畜牧业中发挥着越来越重要的作用,其使用量逐年增加,被誉为“牧草之王”。秋眠性是紫花苜蓿在夏末、秋季所表现出来的植株生长速率下降、茎枝匍
研究目的:本研究拟采用安罗替尼抑制肿瘤血管新生,改善非小细胞肺癌的乏氧微环境,再结合Carbogen气体给予高浓度氧气吸入,再联合同时结合现代放疗技术,研究其对非小细胞肺癌
随着科学和经济的发展,人们对于农产品的需求量越来越多,因此,设施大棚用地作为保障高效高产的重要手段被人们广泛的应用,设施大棚在农业生产中的位置也越来越重要。设施大棚
随着工业化的快速推进,工业过程的复杂化及规模化程度越来越高,这导致故障发生的几率增加,进而导致工业事故的发生。此外,传感技术的发展使得越来越多的故障数据被保存下来,传统的故障诊断方法已难以适应大数据背景下的要求。有效的故障诊断技术能够及时发现故障,确保生产过程安全运行。深度学习利用较深的网络层将非线性函数进行组合,从而使其具备强大的数据表达能力,因此在诸多领域都表现优异。本文以此为出发点,研究基于
近20年来（1997-2016年）四川麦区共审定小麦新品种约165个,这些小麦新品种的培育与生产应用,对阻击条锈病在西南麦区乃至黄淮和长江中下游等小麦主产区的多次大面积危害及解决四
1型鸭甲型肝炎病毒（Duck hepatitis A virus type 1,DHAV-1）是鸭病毒性肝炎的重要病原,主要感染三周龄以内的雏鸭,发病雏鸭的死亡率高达100%。国内外对于该病的防治措施主要是
目的:抑制炎症性骨溶解已成为假体周围骨溶解(periprosthetic osteolysis,PPO)药物治疗的主要靶点。MiR-106b是新发现的miRNA,在肿瘤生物学、炎症、骨量调控等方面发挥重要作