论文部分内容阅读
目前,关于药用植物资源保护的研究中,药用植物的内生真菌已经成为药用植物资源研究的一个新热点。由于内生真菌的次级代谢产物中含有与药用植物相同或相似的生物活性物质,所以研究药用植物内生真菌多样性,利用内生真菌发酵生产药物具有相当的优势。本文首先对内生真菌的国内外研究概况及其研究意义进行了综述。从内生真菌的分布、生物多样性、代谢物质的多样性到内生真菌的生物学作用做了介绍,并且对天麻及应用价值做了简单概述。本文以我国传统中药——天麻(Gastrodia elata B1)为实验材料,对天麻内生真菌的菌群组成及活性成分进行初步研究。取得以下结果：1、内生真菌的分离鉴定：采用组织印迹培养法,对产自贵州、四川、陕西、云南等地天麻的不同组织进行内生真菌的分离,并确定如何区分组织内生真菌与表面附生菌的方法。实验结果表明,天麻内生真菌分离的表面消毒以75%酒精和0.1%升汞结合的方法较好。在所试条件下共计分离得到94株内生真菌。对其中分离纯化的64株真菌,经形态学与分子生物学鉴定结果结合鉴定,分属于4个亚门、6纲、8目、11科、15属。鉴定结果在一定程度上反应了天麻内生真菌的生物多样性。采集于不同地区的天麻中均分离到了一定数量、不同类群的内生真菌,表明内生真菌在天麻体内广泛存在。天麻不同组织部位内生真菌的种类存在着一定的差异。块茎中鉴定的43株真菌分布于12个属(占27.9%),花茎中鉴定的10株菌分布于5个属(占50%),花中鉴定的7株菌分布于4个属(57.1%),果实中鉴定的4株菌分布于3个属(75%)。本试验还对同一季节不同地点来源的天麻块茎内生真菌进行了研究,其数量和种类存在着差异。数量上贵州大方的优势菌群为刺盘孢属(Colletotrichum sp.),占总数的16%；贵州毕节和四川广元的优势菌群是链格孢属(Alternaria sp.),分别是4株和5株,占总数的16%和20%。种类上,四川广元的内生真菌种类所占比例最高,共鉴定9株分布于5个属,占55.6%。2、产天麻素内生真菌的筛选：本文采用薄层层析TLC方法与高效液相色谱HPLC结合,从3株内生真菌DF101 (Chaetomium sp.)、BY302 (Fusarium sp.)、SC108 (Armillaria sp.)的发酵产物中检出天麻素,DF101为0.057mg/g, BY302为0.089mg/g, SC108为0.184 mg/g；对照品天麻中天麻素含量为1.038 mg/g,约为最高含量SC108的6倍。这3株内生真菌有2株来自块茎,1株来自花茎。