一个新的内质网颗粒蛋白,RTN3-A的基因克隆及其功能初步分析

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RTN基因家族是涉及膜泡运输及细胞生长分化的一类重要基因。在哺乳动物中,目前已经鉴定出四种RTN基因的存在,每个RTN基因都产生两个或两个上以上的转录本。其中每个基因的最长转录本几乎都在脑中特异性表达。在研究中,作者通过在NCBI进行数据挖掘及EST拼接分析,发现了一个新的RTN3转录本。此转录本中2.3kb的大外显子是已知的RTN3转录本所不具有的。因为其序列大大长于原来所发现的RTN3转录本,根据RTN家族成员命名规则,给它命名为RTN3-A。通过克隆及测序人类及小鼠RTN3-AcDNA组装片段,证实了预测的人类RTN3-A和小鼠Rtn3-A序列的正确性。在RNA水平上,通过16种组织的Northernblot分析,发现RTN3-A主要在脑中表达,并且其转录本的大小也与作者的预测完全一致。在蛋白质水平上,以抗RTN3所有转录本编码蛋白的公共C-末端19个氨基酸的抗体进行Westernblot分析,在小鼠脑中证明了这种110kDa的RTN3-A蛋白的存在。通过小鼠Rtn3-AcDNA在鼠脑区的原位杂交分析发现,Rtn3-A在小鼠脑中呈现明显的区域性分布。在大脑皮层,海马及小脑的Purkinje细胞中,发现了强烈的Rtn3-A信号。在下丘脑区我们也发现了Rtn3-A信号的存在。通过比较,发现RTN3-A与RTN4-A在组织分布上有明显的相似性,同时RTN3-A与RTN4-A在蛋白质结构上分别具有RTN3-B1与RTN4-B1/NOGO-B二者相互作用的区域。由于目前已知RTN4-A的功能与神经发育的可塑性有关,能抑制神经元轴突与树突的生长,故以上现象提示RTN3-A很可能也与RTN4-A相互作用从而在调控神经细胞突触的再生中发挥重要的作用。
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