论文部分内容阅读
目的: 近视是发病率高的屈光不正，近年来近视人数日益增多，但其发病机制未明。有研究发现PPARα激动剂玻腔注射可以抑制小鸡镜片诱导性近视形成，本实验室研究也发现球旁注射PPARα激动剂非诺贝特及GW7647可以抑制豚鼠形觉剥夺性近视的形成;这些均表明PPARα可能参与了对近视的调控。本实验室通过RNA-sequence研究也发现形觉剥夺小鼠巩膜内PPARα及其下游靶基因的表达下调，提示形觉剥夺性近视过程中伴随着PPARα通路活性的下降。在此基础上，本实验室引进了PPARα全身敲除的小鼠，发现PPARα缺失可诱导小鼠屈光发育显著向近视方向偏移，说明PPARα参与了小鼠屈光发育及正视化的调节。巩膜作为最终的效应器官，在近视过程中普遍会发生胞外基质重塑的过程。通过对PPARα敲除小鼠模型的研究，本课题组也发现PPARα全身敲除小鼠巩膜胶原表达显著低于同窝仔野生型小鼠。在原代培养的巩膜成纤维细胞上我们也发现PPARα激动剂非诺贝特可以显著抑制细胞中胶原的合成。因此，为明确巩膜PPARα在近视形成中的调控作用，本研究拟通过特异性干预巩膜PPARα，明确巩膜PPARα对小鼠屈光发育的调控作用。 方法: 采用出生后21日龄的野生型(willdtype，WT)雄性近交C57BL6小鼠作为实验动物。将经过屈光等参数筛选出的小鼠随机分为三组:正常对照组，不做任何处理;对照病毒组，右眼注射病毒;包装目的序列的病毒组，右眼注射病毒。采用Tenon's囊下病毒注射方式，分别注射PPARα过表达病毒和shRNA敲减病毒两种不同的病毒。通过实时定量PCR检测病毒注射的有效性和特异性，并检测巩膜Ⅰ型胶原的变化情况。 结果: (1) Tenon's囊下注射过表达病毒后，注射病毒眼的巩膜PPARα转录水平显著增加，巩膜胶原及PPARα下游靶基因mRNA水平没有明显变化;小鼠屈光发育没有明显变化，眼轴没有明显变化;(2)与对侧眼相比，Tenon's囊下注射AAV8-shPPARα病毒2，4周后，小鼠注射眼屈光显著向近视方向偏移（2周:注射眼-2.47±0.45D vs.对侧眼-0.26±0.05，p＜0.01;4周:注射眼-0.79±0.14 vs.对侧眼2.56±0.47，p＜0.001）;与对侧眼相比，注射病毒眼的眼轴、前房深度、玻璃体腔深度、晶体厚度、角膜前后表面曲率均没有明显变化。与对侧眼相比，注射AAV8-Scarmble病毒组注射眼屈光、眼轴等参数变化不明显。 结论: 组织特异性过表达巩膜PPARα对小鼠的屈光发育没有影响;组织特异性敲减巩膜PPARα可诱导小鼠近视的形成。