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肠道病毒71型(EV-A71)传染性极强,主要感染婴幼儿,引起以手足口病(HFMD)为首的疾病。因其嗜神经性及毒性强,与其他病原体相比,EV-A71感染更容易伴发严重的中枢神经症状,可能致瘫甚至危及患儿生命,对人类特别是婴幼儿健康构成了巨大的威胁。因此,早期诊断对于疾病的控制和治疗非常重要。目前EV-A71的检测方法主要是荧光定量PCR技术,其操作繁琐,且费用昂贵,亟待有更好的检测方法。同时,对于手足口病,特别是重症感染的治疗主要以对症治疗为主,目前并没有针对EV-A71的特异性抗病毒药物。适配体(aptamer)是在体外通过指数富集配体的系统进化技术(SELEX)筛选所得的能特异性与目标相结合的核酸序列。相比较抗体而言,适配体在合成与修饰,靶物质的种类范围,免疫原性,合成成本等方面更具有优势。因此,适配体在病毒检测和治疗中具有广阔的应用前景。基于该研究背景,在本课题的研究中,我们在大肠杆菌中重组表达EV-A71 VP1蛋白并利用该蛋白筛选出了三条对EV-A71具有高度特异性及亲和性的DNA适配体V7、V11、V21。三条适配体的特异性基本一致,我们根据亲和性的检测结果,选择了对EV-A71 VP1亲和性更高的V11和V21来进行后续的研究,构建了EV-A71的化学发光适配体传感器,并对适配体抑制EV-A71感染进行了初步探索。在构建适配体传感器的研究中,我们首先将氨基修饰的适配体V21包被在羧基磁珠上得到免疫磁珠,用于捕获样本中的EV-A71病毒颗粒,再加入生物素(biotin)修饰的适配体V11(biotin-V11)去结合被捕获的病毒颗粒,然后加入链霉亲和素修饰的辣根过氧化物酶(SA-HRP)与biotin-V11结合,从而形成磁珠-V21-病毒-V11-HRP的夹心结构,最后加入化学发光底物液A、B,利用复合物上连接的HRP与底物液发生酶促反应,产生强烈的425nm荧光,通过荧光读数器检测荧光强度,根据不同的荧光强度推算出样本中EV-A71病毒的含量。整个检测过程仅需40min。在适配体抑制EV-A71感染的相关试验中,我们用适配体V11、V21分别对病毒进行预处理,将预处理过的病毒感染人横纹肌瘤细胞(RD细胞),我们发现,处理组中RD细胞中的病毒RNA表达较对照组和空白组有明显下调。同时,适配体处理组中RD细胞的VP1蛋白表达也明显低于未处理组。提示V11、V21具有抑制EV-A71感染的功能。