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目的:肺纤维化(Pulmonary fibrosis)定义为由不明原因所引起的慢性进展性间质性肺炎的一种特殊形式。由于发病机制不明,尚无彻底治愈的方法,其中上皮-间充质转分化(Epithelial-mesenchymal transiton,EMT)造成了肌成纤维细胞的异常增殖,使得细胞外基质沉积增多,诱发肺组织纤维化,因而EMT在肺纤维化的形成过程中发挥着重要作用。因此,抑制EMT或许会成为减缓肺纤维化发展的潜在治疗手段。我们前期的研究结果表明,异常表达的长链非编码RNA (Long non-coding RNAs,lncRNAs)与肺纤维化密切相关,但lncRNA作为竞争性内源RNA (Competitive endogenous RNA,ceRNA)在肺纤维化发展中的研究还处于起步阶段。本论文基于 ceRNA 假说揭示了 lnc-PCE( lncRNA promotes cell cycle during EMT)在肺纤维化中的功能和调控机制,或许会成为治疗肺纤维化的潜在靶点。方法:气管滴注博莱霉素建立大鼠肺纤维化动物模型。基因芯片技术筛选大鼠肺纤维化模型中差异性表达的lncRNA,采用TGF-β1建立大鼠肺上皮Ⅱ型细胞EMT 模型;荧光定量 PCR 检测 lnc-PCE、miR-344a-5p、miR-138-5p、miR-484、miR-370-3p在大鼠肺纤维化肺组织及RLE-6TN细胞EMT模型中的表达趋势;化学比色法检测羟脯氨酸的含量;通过功能获得和缺失(Gain-andloss-of-function)实验,在RLE-6TN细胞中上调或下调lnc-PCE和miR-344a-5p的表达;免疫荧光检测 α-SMA 表达量;Westernblot 检测 α-SMA、Snail、CyclinE、CyclinB、PCNA和MAP3K11蛋白的表达;通过PI染色DNA的变化检测细胞周期的变化。RTCA细胞动态实时监测技术检测RLE-6TN细胞的增殖情况;荧光双报告素酶验证了lnc-PCE 与 miR-344a-5p、miR-344a-5p 与 MAP3K11 之间的靶点关系。结果:基因芯片结果表明lnc-PCE在模型组中上调表达,且与羟脯氨酸的含量成正相关,miR-344a-5p 表达下调,miR-138-5p、miR-484 和 miR-370-3p 表达上调;在细胞模型中,lnc-PCE siRNA抑制EMT、细胞周期和增殖,使相关指标蛋白(α-SMA、Snail、PCNA 和 cyclinE)表达减低;Lnc-PCE3’ UTR 序列 GAGCCUG与miR-344a-5p的种子序列CUCGGAC互补,两者互为靶基因;MAP3K11 3’ UTR序列GAGCCUG与miR-344a-5p的种子序列CUCGGAC互补,两者互为靶基因。过表达miR-344a-5p降低了 lnc-PCE和MAP3K11的表达,抑制了 lnc-PCE的促EMT作用;而沉默miR-344a-5p使lnc-PCE和MAP3K11表达上调,并产生了促进类似EMT的结果;结论:Lnc-PCE可以通过与MAP3K11竞争性结合miR-344a-55p,保护了MAP3K11蛋白,促进了 EMT、细胞周期和增殖,诱发了肺纤维化的发生发展。