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光敏剂的光漂白是光动力反应中的一个伴随过程,是指光照造成光敏剂吸收光的能力和荧光效率减弱的现象。光敏剂分子与光相互作用不但发生光敏化反应,也可与光敏化反应中生成的单态氧等产物相互作用,发生自敏光氧化反应,使反应体系内的光敏剂分子不断被消耗。当ALA被添加到HL60细胞时,ALA诱导的PpIX在HL60细胞内多种细胞器分布的特点决定了亚细胞器都有可能成为光敏化及自敏光敏化的反应位点。
原子力显微镜微镜(Atomic Force Microscope,AFM)因其制作标本简单、观察环境广泛、扫描分辨率较高和超微图像清晰等诸多优点而广泛应用于生物医学领域。原子力显微镜用于观测ALA-PDT作用前后的HL60细胞细胞膜的超微型形态变化,有助于为ALA灭活白血病HL60细胞实验提供形态学依据。
论文首先引入了本课题的研究动机和主要研究内容。第一部分概述了基于ALA光动力疗法治疗白血病的发展,并总结了光动力疗法的三个基本要素;第二部分对光敏剂的光漂白原理和现象进行了阐明,并概述光敏剂光漂白的研究现状;第三部分介绍实验所使用的光反应室的设计及光源的选择;第四部分研究了ALA-PDT灭活HL60细胞的实验效果,并对光敏剂亚细胞分布位点光漂白现象进行实验研究;第五部分通过原子力显微镜,初步探讨ALA-PDT作用前后的HL60细胞超微型形态变化;第六部分总结和展望。
本论文的主要研究工作有:
1.从理论上分析了光动力过程中光敏剂亚细胞分布位点的存在的光漂白。
2.采用细胞培养技术,体外培养HL60白血病肿瘤细胞,对HL60细胞的生长规律和特性进行了研究。
3.利用细胞器荧光探针测量ALA-PDT过程中三种细胞器的荧光强度变化,对光动力过程中的光敏剂亚细胞定位光漂白现象进行分析。得出对于HL60细胞来说,亚细胞器的光漂白程度为:线粒体)溶酶体)内质网。线粒体是光敏化作用的主要反应位点。
4.通过ALA-PDT作用前后的HL60细胞AFM观测,探讨HL60细胞膜的超微型形态变化,为ALA灭活白血病HL60细胞实验提供形态学依据。