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背景与目的：
细胞凋亡异常是肿瘤发生发展的重要机制之一。细胞凋亡分子机制主要是通过蛋白通路调节系统来实现的，在细胞凋亡的过程中半胱天冬酶家族(caspases)起着关键作用，而这些凋亡效应蛋白受一组凋亡抑制蛋白(inhibitors of apoptosis，IAPs)的调控。Smac/DIABLO(以下简称Smac)是一种重要的凋亡调节蛋白，能解除IAPs对caspase的抑制作用，进而促进细胞凋亡。在多种肿瘤组织中Smac表达显著降低或缺失，提示其与肿瘤的发生发展关系密切。PUMA/Bbc3(以下简称PUMA)是新近发现的Bcl—2家族BH—3亚家族中的促凋亡成员，在p53依赖和非依赖途径的细胞凋亡启动中发挥重要的作用。本实验旨在探讨Smac和PUMA在鼻咽癌发生发展中的作用和意义，为鼻咽癌的临床诊治和预后预测提供依据。具体内容包括研究Smac和PUMA在鼻咽癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系，并从细胞水平探讨Smac基因的表达对鼻咽癌细胞凋亡的影响。
方法：
收集130例鼻咽癌和63例鼻咽慢性炎病例，采用免疫组织化学的方法分别检测Smac和PUMA的表达，统计分析其表达与临床病理特征的相关性。采用TUNEL法检测鼻咽癌组织的凋亡指数，统计分析Smac和PUMA的表达与鼻咽癌凋亡指数的相关性。在培养细胞中观察高表达Smac对鼻咽癌细胞凋亡的影响。
结果：
1.Smac和PUMA在鼻咽癌组织中呈低表达
免疫组化结果显示Smac阳性表达定位于胞浆。63例鼻咽慢性炎组织中，Smac阳性表达率为95.2％，130例鼻咽癌组织Smac阳性表达率为82.3％。两组阳性率的差异有统计学意义(P=0.014)。结果表明鼻咽癌组织中Smac的表达水平显著低于鼻咽慢性炎组织。
免疫组化结果显示PUMA阳性表达定位于胞浆。63例鼻咽慢性炎组织中，PUMA阳性表达率为88.9％，130例鼻咽癌组织PUMA阳性表达率为72.3％。两组阳性率的差异有统计学意义(P=0.010)。结果表明鼻咽癌组织中PUMA的表达水平显著低于鼻咽慢性炎组织。
2.Smac在鼻咽癌病例中的表达与临床分期和淋巴结分期呈负相关，与预后呈正相关
Smac在鼻咽癌病例中表达强度有差异。130例鼻咽癌组织中Smac强阳性病例32例(24.6％)，弱阳性病例75例(57.7％)，阴性病例23例(17.7％)。Smac的表达与临床分期(P=0.003)和淋巴结分期(P=0.008)呈负相关。结果提示鼻咽癌组织中Smac的表达水平高低与鼻咽癌临床发展进程快慢相关。
鼻咽癌组织中Smac阳性表达的患者比阴性表达的患者预后好(P=0.002)，且与患者的无瘤生存期呈正相关(P=0.001)。
3.Smac、PUMA的表达与鼻咽癌病例的凋亡指数呈正相关在130例鼻咽癌患者的石蜡组织中，Smac和PUMA的表达与凋亡指数的相关系数分别为0.237(P=0.037)和0.453(P=0.000)。Smac和PUMA的表达呈正相关，相关系数为0.434(P=0.000)。另外，鼻咽癌病例的凋亡指数与患者血清中EB—VCA—IgA的滴度呈正相关，相关系数为0.240(P=0.034)。
4.体外高表达Smac能促进丝裂霉素诱导的鼻咽癌细胞凋亡在低剂量丝裂霉素诱导作用下，转染了pcDNA3.1(+)—smac组的HONE-1细胞生存率较pcDNA3.1(+)组的细胞生存率明显下降。流式细胞术结果表明，pcDNA3.1(+)加丝裂霉素组的凋亡率为19.3％，pcDNA3.1(+)—smac加丝裂霉素组的凋亡率为31.2％，组间凋亡率差异有统计学意义(P=0.009)。结果提示体外高表达Smac能促进丝裂霉素诱导的鼻咽癌细胞凋亡。
结论：
1.Smac和PUMA在鼻咽癌组织中呈低表达，Smac的表达与临床分期和淋巴结分期呈负相关，并与预后呈正相关，结果提示Smac和PUMA低表达是鼻咽癌的发生发展的分子事件。
2.Smac和PUMA的表达与鼻咽癌病例的凋亡指数呈正相关，结果提示Smac和PUMA是鼻咽癌细胞凋亡的相关分子，这两个分子可能通过影响鼻咽癌细胞的凋亡而参与了鼻咽癌的发生发展。
3.体外高表达Smac能促进丝裂霉素诱导的鼻咽癌细胞凋亡，体外实验初步结果进一步提示Smac是鼻咽癌细胞凋亡的相关分子，这也可能为鼻咽癌的生物治疗提供参考依据。