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精原干细胞（SSCs）是一种特殊的、也是唯一能够将雄性哺乳动物的遗传物质遗传给子代的二倍体细胞。目前,SSCs已被应用于转基因动物的生产、男性不育症的治疗等领域。然而,SSCs的体外培养技术尚不完善,与SSCs增殖有关的通路和机制尚不明确。为了研究表皮生长因子（EGF）和血小板衍生生长因子-BB（PDGF-BB）对山羊SSCs体外增殖的影响,本研究将60-75日龄的山羊睾丸（n=6）剪碎后,利用两步酶消化法得到睾丸单细胞悬液,然后通过两次差速贴壁法分离纯化山羊SSCs,采用碱性磷酸酶染色法及免疫荧光染色法鉴定山羊SSCs。随后,单独添加不同浓度的EGF和PDGF-BB,并联合添加EGF和PDGF-BB培养山羊SSCs。利用甲基噻唑基四唑（MTT）法分别检测SSCs培养3天,6天和9天后的吸光度,筛选最佳单独添加浓度和配伍添加浓度;然后,利用western blotting检测空白对照组及3个最佳浓度试验组中的ERK1/2蛋白和磷酸化ERK1/2蛋白的表达量,运用real time PCR技术检测空白对照组及3个最佳浓度试验组中BAD、BCL2和BAX基因的相对表达量;最后,添加MEK1/2的特异性抑制剂PD0325901后,再次检测空白对照组及3个最佳浓度试验组中的ERK1/2蛋白、磷酸化ERK1/2蛋白、BAD、BCL2和BAX基因的表达量。主要研究结果如下:1.睾丸单细胞悬液经两次差速贴壁纯化后,能够获得纯度较高的SSCs。染色结果显示,纯化后的细胞经钙钴法碱性磷酸酶染色后呈AKP阳性,SSCs被染色成黑色;免疫荧光染色结果表明,纯化后的细胞大量表达SSCs的标记分子THY1和PLZF。2.与对照组相比,单独添加25 ng/mL EGF或35 ng/mL EGF均可以显著促进山羊SSCs的自我更新（P<0.05）,但两者之间差异不显著（P>0.05）;单独添加20 ng/mL的PDGF-BB的效果最佳（P<0.05）;同时添加25 ng/mL的EGF和20 ng/mL的PDGF-BB对山羊SSCs的增殖效果显著高于其他组合（P<0.05）,培养6 d后,其OD490为0.736。3.Western blotting结果显示:与对照组相比,3个最佳试验组的ERK1/2蛋白的表达均有不同程度的升高,其中联合添加20 ng/mL PDGF-BB+25 ng/mL EGF处理组的增幅最大,单独添加20 ng/mL的PDGF-BB处理组变化最小;添加MEK1/2的特异性抑制剂后,4个处理组的ERK1/2蛋白的表达水平均降低,但3个试验组的变化幅度小于对照组。对照组的磷酸化ERK1/2蛋白的表达量均明显低于其他3个试验组,后者大约是前者的35倍;添加特异性抑制剂后,4个处理组的磷酸化ERK1/2蛋白的表达量降低至原先的10%30%。4.real time PCR结果表明:与对照组相比,3个试验组的BCL2基因表达量均上调。其中,联合添加20 ng/mL PDGF-BB+25 ng/mL EGF处理组的细胞抗凋亡能力显著高于其他组（P<0.05）,25 ng/mL EGF组的BCL2表达水平显著高于对照组（P<0.05）,然而20 ng/mL PDGF-BB组中的抗凋亡基因BCL2表达水平与对照组相比差异不显著（P>0.05）;与其他所有试验组相比,对照组的促凋亡基因BAX和BAD的表达水平显著升高（P<0.05）,而试验组之间差异均不显著（P>0.05）。添加PD0325901后,所有处理组中的抗凋亡基因BCL2的表达量极显著降低（P<0.001）,仅为原先的10%20%,而BAX和BAD表达水平极显著升高（P<0.001）。结论:单独或联合添加EGF和PDGF均有利于促进山羊SSCs的自我更新,我们推测这两种生长因子可能是通过Ras/ERK1/2信号通路来调控山羊SSCs磷酸化ERK1/2蛋白的表达,进而提高SSCs的抗凋亡能力。