论文部分内容阅读
本试验在成功建立雏鸡肝脏损伤模型的基础上,从细胞自噬与凋亡的角度探讨白术多糖(Polysaccharide of Atractylodes Macrocephala Koidz,PAMK)对环磷酰胺(cyclophosphamide,CTX)诱导的雏鸡肝脏损伤的影响,应用酶联免疫吸附(ELISA)法检测雏鸡血清中免疫球蛋白含量、血清及肝脏中细胞因子含量,应用光镜和透射电镜对雏鸡肝脏进行形态学观察,应用实时荧光定量PCR法(Realtime PCR)和免疫印迹法(Western Blot)检测与细胞自噬及凋亡相关基因mRNA表达量和蛋白含量。研究结果如下:(1)血清中免疫球蛋白和细胞因子含量的研究结果显示:与对照组相比,环磷酰胺组雏鸡血清中免疫球蛋白(IgM和IgA)和细胞因子(IL-4和IL-6)含量显著降低(P<0.05)。与环磷酰胺组相比,白术多糖环磷酰胺联合组雏鸡血清中(IgM和IgA)和IL-6含量均显著升高(P<0.05)。该研究结果表明,环磷酰胺可导致雏鸡血清中免疫球蛋白和细胞因子含量下降,而白术多糖可缓解雏鸡血清中免疫球蛋白和细胞因子含量的下降。(2)肝脏中细胞因子含量的研究结果显示:与对照组相比,环磷酰胺组雏鸡肝脏中(IL-2、IL-4和IL-6)含量显著降低(P<0.05)。与环磷酰胺组相比,白术多糖环磷酰胺联合组雏鸡肝脏中(IL-2和IL-4)含量显著升高(P<0.05)。该研究结果表明,环磷酰胺可降低雏鸡肝脏中细胞因子含量,而白术多糖可促进肝脏细胞因子的分泌。(3)光镜结果显示:与对照组相比,环磷酰胺可破坏雏鸡肝脏细胞形态结构的完整性、使肝细胞索排列紊乱、并出现炎性细胞浸润。电镜结果显示:与对照组相比,环磷酰胺可导致雏鸡肝脏线粒体受损,并出现自噬小体和凋亡小体。该研究结果表明,自噬与凋亡参与肝脏损伤的病理过程。(4)对自噬相关通路的研究结果显示:与对照组相比,环磷酰胺组雏鸡肝脏中LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin1、Dynein、ATG5和TOR的mRNA表达量显著增加(P<0.05),PI3K和AKT的mRNA表达量显著降低(P<0.05);同时Beclin1、Dynein和ATG5的蛋白含量也显著增加(P<0.05)。与环磷酰胺组相比,白术多糖环磷酰胺联合组雏鸡肝脏中LC3-Ⅱ、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ和ATG5的mRNA表达量显著降低(P<0.05),PI3K和AKT的mRNA表达量显著增加(P<0.05)。该研究结果表明,环磷酰胺可诱导雏鸡肝脏发生自噬,而白术多糖能够缓解环磷酰胺诱导的雏鸡肝脏自噬的发生。(5)对凋亡中线粒体通路的研究结果显示:与对照组相比,环磷酰胺组雏鸡肝脏中促凋亡基因(Caspase-3、Caspase-9、Bax和p53)mRNA表达量显著增加(P<0.05),抑凋亡基因Bcl-2 mRNA表达量显著下降(P<0.05);同时Caspase-3、Caspase-9和Bax的蛋白含量显著升高(P<0.05),抑凋亡基因Bcl-2的蛋白含量显著降低(P<0.05)。与环磷酰胺组相比,白术多糖环磷酰胺联合组雏鸡肝脏中Caspase-3、Bax和抑凋亡基因Bcl-2的mRNA表达量均呈现出与环磷酰胺组相反的趋势(P<0.05)。此外,Caspase-3和Bcl-2蛋白表达水平的变化趋势和它们相应的mRNA表达水平变化趋势是一致的。该研究结果表明,线粒体通路参与了环磷酰胺诱导的雏鸡肝脏细胞凋亡,而白术多糖可通过调节线粒体通路关键基因及蛋白的表达缓解环磷酰胺诱导的雏鸡肝脏细胞凋亡。(6)对凋亡中内质网应激通路的研究结果显示:与对照组相比,环磷酰胺组雏鸡肝脏中ATF4、ATF6和GRP94 mRNA表达量显著增加(P<0.05);同时雏鸡肝脏中GRP94的蛋白含量也显著增加(P<0.05)。与环磷酰胺组相比,白术多糖环磷酰胺联合组雏鸡肝脏中ATF4和GRP94mRNA表达量和GRP94蛋白含量均显著降低(P<0.05)。该研究结果表明,内质网应激通路参与了环磷酰胺诱导的雏鸡肝脏细胞凋亡,而白术多糖可通过调节内质网通路关键基因及蛋白的表达缓解环磷酰胺诱导的雏鸡肝脏细胞凋亡。(7)对凋亡中死亡受体通路的研究结果显示:与对照组相比,环磷酰胺组雏鸡肝脏中FADD、Fas和Caspase-8的mRNA表达量显著增加(P<0.05);同时FADD和Caspase-8的蛋白含量也显著升高(P<0.05)。与环磷酰胺组相比,白术多糖环磷酰胺联合组雏鸡肝脏中Fas和Caspase-8的mRNA表达量显著降低(P<0.05);白术多糖环磷酰胺联合组雏鸡肝脏中FADD和Caspase-8蛋白含量显著降低(P<0.05)。该研究结果表明,死亡受体通路参与了环磷酰胺诱导的雏鸡肝脏细胞凋亡,而白术多糖可通过调节死亡受体通路关键基因及蛋白的表达缓解环磷酰胺诱导的雏鸡肝脏细胞凋亡。综上所述,环磷酰胺可导致雏鸡血清和肝脏组织中与免疫相关细胞因子含量下降、肝脏发生自噬和凋亡等形态学损伤,而白术多糖可以通过促进细胞因子的分泌、调节与自噬和凋亡相关基因和蛋白的表达来缓解该损伤。