【摘 要】
：
为了提高人小肠三叶因子（hITF）的产率以用于结构功能和生理生化研究，我们开发建立了hITF在Pichia pastoris酵母菌中的高效表达系统。利用PCR技术从人胚胎小肠细胞总的DNA中筛选
论文部分内容阅读
为了提高人小肠三叶因子（hITF）的产率以用于结构功能和生理生化研究，我们开发建立了hITF在Pichia pastoris酵母菌中的高效表达系统。利用PCR技术从人胚胎小肠细胞总的DNA中筛选到hITF cDNA，将其克隆到酵母表达载体pPIC9K并转化重组到酵母染色体中。筛选到目的菌株后，优化表达和纯化条件，最终确定S Sepherose FF-Q Sepherose FF-Superdex 75的纯化方案。每升培养液可得到15-20mg的hITF，产率30﹪，纯度大于95﹪。产物经SDS-PAGE，HPLC，MS，N端序列分析，氨基酸组成分析，等电点测定，紫外全波长扫描，Western Blotting等方法分析后确证正确无误。利用乙醇诱发的大鼠胃溃疡模型研究hITF体内预防和治疗胃肠道损伤的效果。发现在胃溃疡发生1h前注射0。2～1mg的hITF有明显的预防保护作用；而溃疡发生后0。5～5h，静脉注射0。2～1mg的hITF有较好的治疗作用。三叶肽蛋白家族成员各自含有数量不同的特征结构域—P-Domain。为了研究P-Domain的数量对蛋白活性及结构的影响，我们构建并表达了含有两个P-Domain的Di-ITF突变体，并且同天然的hITF在理化性质和生物活性方面作了一系列比较。结果表明Di-ITF和hITF有相似的抗原性。两者对胃溃疡的治疗和预防效果也相似。我们的结论是P-Domain是整个蛋白的抗原决定簇和生物活性中心所在部位。我们也利用Insign Ⅱ（97。0）软件，以PDB数据库中已有的PS2和SP晶体及NMR结构为模板，对hITF和Di-ITF的结构进行了预测分析。并用Discover-3提供的分子动力学方法优化出能量稳定的构象，比较准确的反应出蛋白的空间结构，从理论上为我们分析实验结果提供了帮助。
其他文献
岩质海岸防护林水土保持树种的合理选择与配置是形成有效防护林体系,改善当地生态环境的关键因素.论文主要通过研究各防护林树种细根生物量、年生长量、年死亡分解量和细根周
该文根据沈阳市自然环境和社会环境的结构特征、分异规律和所存在的主要生态环境问题,依据区内相似性与区间差异性的基本原则,利用定性分析和定量分析的方法,对沈阳市进行了
肿瘤的发生和发展可以看作是一个由突变累积与微环境相互作用的过程。在这个过程中，肿瘤细胞生长所需的资源和空间经历了由充足到稀缺的变化。经典的r/k选择理论指出，处于不稳
随着可关断电力电子器件(Insulated-gate Bipolar Transistor, IGBT; Gate-Turn Off Thyrisitor, GTO等)和PWM技术的发展,基于电压源换流器的轻型高压直流输电(Voltage Sourced Converter-High Voltage Direct Current, VSC-HVDC)系统越来越受到人们的关注。与传统的HVDC输电系
随着电力需求的快速增长,电力系统规模不断扩大,传统的集中发电、高压远距离、大容量输电以及大电网互联集中供电的电网模式暴露出越来越多安全性和可靠性方面的问题。新能源分布式发电系统以其环保、高效、分散、灵活的发电方式越来越受到世界各国的关注,其与大电网相结合被认为是21世纪电力系统的发展方向。本文以新能源分布式发电系统并网运行与控制为选题,从理论分析、运行仿真和实验验证三个方面,深入研究了分布式发电系
以喜温植物甜椒(Capsicum annuum L.)抗冷品种1141和不抗冷品种0004为试验材料,研究了两品种冷锻炼苗与对照苗叶片光合特性、叶绿荧光参数、叶黄素循环组分及活性氧清除系统
为考察人肝癌细胞恶性生长相关的蛋白质组变化,以及探索相关的具重要功能的蛋白质,研究人员应用蛋白质组分离和分析技术研究了人肝癌细胞系BEL-7404和正常肝细胞系L-02之间,
本文采用60Coγ射线和甲基磺酸乙酯(EMS)对山黧豆进行物理化学诱变复合处理，以期筛选低毒山黧豆变异系，并对处理后的种子长出的植株抗氧化酶类活性变化进行了研究，阐明山黧豆抗
该研究的主要目的的在于阐明细胞骨架对膜上K离子通道的调节作用,以及细胞 骨架通过细胞骨架相关蛋白-MacMARCKS对跨膜受体蛋白-整合素(Integrin)的调控作用.首 次利用膜片钳
选用碧玉系列散叶生菜(以下简称碧散)、碧玉系列结球生菜(以下简称碧结)、油麦菜(以下简称油麦)、皇帝、凯撒王(以下简称凯王)、高山紫叶生菜(以下简称紫叶)等六个生菜品种为