【摘 要】
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第一部分 Kv通道磷酸化及点突变的研究 电压依赖的钾(Kv)通道是一类参与神经元的兴奋性活动的通道.它的一段保守的T1区对于通道的组装和亚基四聚体的形成有重要的作用.近期有
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第一部分 Kv通道磷酸化及点突变的研究 电压依赖的钾(Kv)通道是一类参与神经元的兴奋性活动的通道.它的一段保守的T1区对于通道的组装和亚基四聚体的形成有重要的作用.近期有证据表明血清剥夺或staurosporine诱导的皮层神经元凋亡与细胞内K<+>丢失是有关联的,用钾通道的阻断剂TEA或提高胞外K<+>减弱外向K<+>电流能减少凋亡.蛋白激酶A(PKA)是一种对细胞存活有重要作用的激酶.该实验室在Kv通道的T1区找到了一段可能被PKA磷酸化的保守序列,并用相应的非磷酸化和磷酸化(如在Kv1.4上是丝氨酸229)多肽免疫兔子得到了抗体(1505IV和1505pV).作者的工作是发现了这两个抗体特异性识别的蛋白的大小分别是100kD和120kD.作者还在HEK293细胞中过表达了Kv1.4,并用PKA的激动剂forskolin刺激,结果用1505pV抗体发现Kv1.4可以被磷酸化.再结合1505IV与商业化Kv1.4抗体识别的蛋白大小相一致的结果,我们认为在神经元中1505IV和1505pV分别识别的是非磷酸化和磷酸化的Kv1.4.另外作者还构建了Kv1.4S229A和Kv1.2S84A突变质粒,为下一步的实验奠定了基础.第二部分 Enoxaparin可减少谷氨酸引起的神经元死亡 小分子量肝素Enoxaparin是一种治疗中风的药物,多数研究结果表明其作用机理是通过抗凝血作用来抑制血栓的形成.但在体外培养的大鼠皮层神经元模型上,我们发现Enoxaparin能减少谷氨酸引起的皮层神经元死亡,而在脑缺血时兴奋性毒性的产生是其中的普遍现象,这意味着Enoxaparin也有可能通过抑制神经元的死亡来治疗脑缺血导致的中风.我们发现同时加入Enoxaparin和谷氨酸比单独加谷氨酸后Bcl-X<,L/S>的mRNA水平下降了.与mRNA水平的变化不同,促凋亡蛋白Bcl-Xs比单独加谷氨酸时下降很多,抗凋亡蛋白Bcl-X<,L>则变化不大.这种表达谱的差异可能是Enoxaparin能对神经元起到保护作用的原因.
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