【摘 要】
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通过筛选皖南尖吻蝮蛇(Agkstrodon acutus)毒腺cDNA文库和RT-PCR方法,从皖南尖吻蝮蛇(Agkstrodon acutus)毒腺得到四种蛇毒金属蛋白酶基因.P-Ⅰ型蛇毒金属蛋白酶acutolysin A
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通过筛选皖南尖吻蝮蛇(Agkstrodon acutus)毒腺cDNA文库和RT-PCR方法,从皖南尖吻蝮蛇(Agkstrodon acutus)毒腺得到四种蛇毒金属蛋白酶基因.P-Ⅰ型蛇毒金属蛋白酶acutolysin A的完整基因,cDNA长度为1632bp,其开放阅读框共编码413个氨基酸残基.P-Ⅰ型蛇毒金属蛋白酶acutolysin C完整基因序列,全长为1650bp.P-Ⅱ型蛇毒金属蛋白酶agacutin基因,全长为14171bp.P-Ⅲ型蛇毒金属蛋白酶acutolysin D,全长2508bp,编码609个氨基酸.比较分析了蛇毒金属蛋白酶和ADAMs结构的相似性,提出了蛇毒金属蛋白酶和ADAMs均具有金属蛋白酶和粘附功能的假设.用离子交换柱(DEAE-Sephadex A-50)层析和凝胶过滤(Sephadex G-75),从皖南尖吻蝮蛇毒中分离得到一非酶组分,acutin,分子量为28kDa,等电点(pⅠ)为5.0.它还抑制小鼠成纤维细胞NIH3T3和转癌基因T6-17和Ⅰ型、Ⅳ型胶原的粘附作用.将acutolysin D的克隆入pGEX-2T载体中,转化大肠杆菌TG-1,用IPTG诱导表达,表达产物具有抑制胶原诱导的血小板凝集活性,但不抑制ADP和凝血酶诱导的血小板凝集.通过一级结构分析,结合空间结构,探讨了蛇毒金属蛋白酶的出血机理,并提出了用点突变手段研究出血机制的突变位点.
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