过氧化氢诱导血管内皮细胞血管紧张素转化酶的过表达及其机制

• 作 者: 周鑫
• 机 构: 哈尔滨医科大学
• 出 处: 哈尔滨医科大学
• 发表日期: 2012年期
• 关键词: 高血压 过氧化氢 人脐静脉内皮细胞 血管紧张素转化酶 环磷酸腺苷

目的：探讨过氧化氢(hydrogen peroxide，H2O2)对人脐静脉内皮细胞血管紧张素转化酶(angiotensin converting enzyme，ACE)的影响及其调节机制。　　方法：以培养的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells，HUVECs)为研究模型。噻唑蓝(3-[4，5-dimethyl-thiazol-2-yl]-2，5-diphenyltetrazolium bromide，MTT)法检测H2O2对HUVECs活力的影响；Terminaldeoxyribonucleotide transferase-mediated dUTP nick end labeling(TUNEL)法检测H2O2对HUVECs凋亡的影响；酶联免疫吸附法(Enzyme-linked immunosorbentassay，ELISA)检测H2O2对HUVECs环磷酸腺苷(cAMP)水平的影响；实时荧光定量聚合酶链式反应法(Real-Time PCR)检测H2O2对HUVECs血管紧张素转化酶mRNA表达水平的影响；免疫印记法(Western Blot)检测H2O2对HUVECs血管紧张素转化酶蛋白表达的影响。　　结果：1.H2O2(50-1000μM)呈浓度依赖性引起HUVECs细胞活力下降及细胞凋亡；2.H2O2使HUVECs血管紧张素转化酶mRNA和蛋白的表达水平升高；3.H2O2升高了cAMP的水平，一个重要的细胞内信使；4.腺苷酸环化酶激动剂Forskolin(10μM)升高了血管紧张素转化酶mRNA和蛋白的表达水平，而蛋白激酶A(protein kinase A，PKA)的抑制剂H-89(10μM)则抑制了由H2O2或Forskolin引起的血管紧张素转化酶mRNA和蛋白表达水平的升高；5.环磷酸腺苷反应元件诱饵寡脱氧核苷酸(CRE-decoy ODNs)，含有环磷酸腺苷反应元件的结合位点，能够通过沉默CREB而影响H2O2或Forskolin引起的血管紧张素转化酶mRNA和蛋白的过表达。　　结论：H2O2通过环磷酸腺苷/蛋白激酶 A/环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(cAMP/PKA/CREB)信号通路调节了HUVECs血管紧张素转化酶的表达，提示氧化应激可能参与了高血压发生发展的病理生理过程。