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目的:探索脑缺血治疗药物脑靶向给药的新思路、新方法和新技术。脑血管疾病具有发病率高、致残率高、死亡率高和复发率高等特点,是威胁人类健康的最大杀手之一。而在脑血管疾病中缺血性脑血管病又占多数约占其总数的55-80％。因此,研制和开发出新型、有效、副作用小的防治脑缺血的药物是目前亟待解决的问题。 银杏又称白果,一贯有“植物元老”及“自然界的活化石”之称。世界各地己经将银杏叶提取物广泛用于治疗呼吸系统、心脑血管系统等疾病。已经证实银杏内酯具有特异性拮抗血小板活化因子的作用。目前己分离得到银杏内酯A,银杏内酯B,银杏内酯C、银杏内酯M、银杏内酯J及白果内酯,其中银杏内酯A的抗血小板活化因子的作用仅次于银杏内酯B。 本论文采用纳米技术,分别选择可生物降解及较好生物相容性的聚乳酸(PLA)和生物降解型高分子材料硬脂酸为载体,以银杏内酯A为模型药物,采用现代靶向制剂技术,制备了脑靶向性银杏内酯A聚乳酸纳米粒(GA-PLA-NP)和银杏内酯A固体脂质体(GA-SLN).对纳米粒进行了外观形态学、粒径、粒度分布研究;建立了HPLC法测定GA的含量,经专属性和方法学认证,确定了该方法的可行性,并进行了纳米粒包封率、载药量等实验研究;建立了HPLC-ELSD法测定血浆中GA的浓度,研究了脑靶向性银杏内酯A聚乳酸纳米粒和银杏内酯A固体脂质体在小鼠体内的药物动力学,通过小鼠组织分布的研究,评价和比较了银杏内酯A聚乳酸纳米粒和银杏内酯A固体脂质体的靶向性,为脑靶向给药提供科学的理论依据。 方法:采用脱溶剂法制备银杏内酯A聚乳酸纳米粒和乳化蒸发-低温固化法制备银杏内酯A固体脂质体。采用正交试验设计优化、筛选最佳处方和制备工艺;采用电子透射显微镜观察纳米粒的外观形态,MALVERN ZETASIZER3000HS激光粒度仪分析粒径及粒度分布;低温超速离心法测定固体脂质纳米粒的包封率、载药量;以GA甘油、乙醇混合溶液为参比制剂,进行GA-PLA-NP和GA-SLN小鼠体内药物动力学和体内组织分布学研究及靶向性评价。 结果:影响聚乳酸纳米粒粒径和包封率的主要因素为水相有机相比、TWEEN80浓度、搅拌速度、投药量;而固体脂质体粒径和包封率主要受卵磷脂硬脂酸比、TWEEN80和甘露醇浓度、乳化温度、搅拌速度等;最佳优化处方与工艺聚乳酸纳米粒为:有机相水相比为1:15;TWEEN80浓度为4％;搅拌速度为1000r/min;投药量为10mg;固体脂质体为:卵磷脂硬脂酸比1:2;TWEEN80和甘露醇浓度为2％+1％;乳化温度为75℃;搅拌速度为1000r/min。优化处方和工艺制备的GA聚乳酸纳米粒和GA固体脂质纳米,透射电镜下大量呈现圆整、均匀的球形微粒,无粘连,GA-PLA-NP平均粒径为127.5nm,GA-SLN平均粒径为142.7nm。 采用HPLC法,以甲醇溶液为溶媒,测定GA-PLA-NP和GA-SLN中GA的含量,辅料不干扰测定,专属性强,方法简便、灵敏,GA在0.2-1.0mg/mL浓度范围内,线性关系良好,回归方程为y=1103.5x+14.614,R2=0.9998;日内、日间精密度的RSD均小于4％,平均回收率大于99％。测得GA-PLA-NP载药量为2.48％±0.002,包封率为54.00％±1.51;GA-SLN载药量为3.60％±0.07,包封率为62.71％±1.20. 建立了高效液相蒸发光散射法测定GA血药浓度及在体内各组织分布的方法,生物样品预处理方法简单,在所选色谱条件下,杂质不干扰GA的测定,回收率高,重现性好。小鼠血浆方法平均回收率为99.44％,日内精密度的RSD小于2％、日间精密度的RSD小于3％;血浆GA浓度在1.3-57μg/mL范围内线性关系良好(R2=0.9983),定量下限为1.3μg/mL。小鼠肝脏方法平均回收率为100.92％,脑方法平均回收率为101.41％,日内精密度RSD均小于2％,日间精密度RSD均小于3％;各组织中GA浓度在1.3-57μg/mL范围内线性关系良好,定量下限为1.3μg/mL,可满足生物样品分析方法的要求。 小鼠体内动力学和小鼠组织器官分布实验结果表明,小鼠尾静脉注射GA溶液药-时曲线符合单室模型特征,半衰期(tl/2)为175.315min,GA-PLA-NP药-时曲线符合单室模型特征,t1/2为1241.349min,GA-SLN药-时曲线也符合单室模型特征,t1/2为1564.575min。小鼠尾静脉注射GA-PLA-NP、GA-SLN后,比GA溶液相靶向效率(Te)0.567分别高出倍和3.07倍。 结论:GA对脑缺血损伤的保护作用显著,但目前普通的口服制剂分布全身,脑组织分布少,对其他组织器官副作用大,制成聚乳酸纳米粒和固体脂质体后药物有效地靶向输送、浓集于脑病变部位,减少用药剂量和用药次数,降低毒副作用,提高治疗指数。体内药物动力学研究结果表明,GA制成聚乳酸纳米粒和固体脂质体后,具有缓释作用,半衰期分别约为注射GA溶液的7.08倍和8.92倍;小鼠体内组织分布学研究结果表明,GA制成聚乳酸纳米粒和固体脂质体后,与GA溶液比较,脑靶向作用明显增加,GA-SLN优于GA-PLA-NP更适宜作为GA脑靶向给药载体。