沉默Med19对人乳腺癌MCF-7细胞侵袭及迁移能力的影响

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目的研究沉默Med19对人乳腺癌MCF-7细胞侵袭及迁移能力的影响,探讨Med19在乳腺癌侵袭和转移方面的作用及作用机制。研究方法针对Med19基因靶序列构建慢病毒表达载体,将慢病毒表达载体转染人乳腺癌MCF-7细胞株,RT-PCR和Western blot检测Med19基因的转录及蛋白表达水平;transwell实验和划痕实验检测细胞侵袭及迁移能力;RT-PCR检测基质金属蛋白酶(MMP-9)和血管内皮生长因子(VEGF)基因转录水平的改变。结果将构建的siRNA-Med19慢病毒表达载体成功转染入人乳腺癌MCF-7细胞;转染siRNA-Med19慢病毒表达载体组(KD组)、空载体组(NC组)及空白组(CON组)MCF-7细胞Med19mRNA表达量分别是0.076±0.033、0.274±0.010、0.272±0.057,与NC组及CON组MCF-7细胞相比,KD组Med19mRNA表达水平下降了72.3%、72.1%,KD组Med19mRNA表达水平显著性降低(P<0.05);KD组、NC组、CON组蛋白表达量分别为0.106±0.037、0.725±0.134、0.721±0.135,与NC组及CON组MCF-7细胞相比,KD组Med19蛋白表达水平下降了85.4%、85.3%,KD组Med19蛋白表达水平显著性降低(P<0.05);KD组、NC组、CON组MCF-7细胞穿过聚碳酸酯膜的细胞数分别为23.8±4.32、43.4±3.65、45.8±5.81,KD组细胞的侵袭能力显著性降低(P<0.05);KD组、NC组、CON组MCF-7细胞在6h、12h、24h分别比较迁移的距离,KD组细胞随着时间的延长,迁移能力显著性下降(P<0.05)。KD组、NC组、CON组MMP-9mRNA表达量分别为361±42.899、581±42.723、588±18.330,KD组较NC组及CON组相比MMP-9mRNA表达量下降了37.87%、38.61%,KD组MMP-9mRNA表达水平显著性降低(P<0.05);KD组、NC组、CON组VEGF mRNA表达量分别为1307.667±75.295、2067.667±54.123、2096±151.615,KD组较NC组及CON组相比VEGF mRNA表达量下降了36.77%、37.64%,KD组VEGF mRNA表达水平显著性降低(P<0.05)。NC组与CON组比,Med19mRNA和蛋白的表达无显著性差异(P>0.05);细胞侵袭和迁移能力无显著性差异(P>0.05);MMP-9和VEGF基因mRNA表达无显著性差异(P>0.05)。结论1、构建的siRNA-Med19慢病毒表达载体转染入人乳腺癌MCF-7细胞后能显著降低细胞中Med19的转录、蛋白表达水平。2、Med19基因沉默降低细胞的侵袭及转移能力,从而抑制乳腺癌的恶性生物学行为。3、Med19基因沉默降低MMP-9和VEGF mRNA的表达,从而抑制乳腺癌细胞的侵袭和转移。
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