猪OLR1基因克隆、序列分析及脂肪酸对其转录表达的影响

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人们为了寻求有效的治疗肥胖的策略,已经将对肥胖的研究开拓到新的分子领域,就是通过抑制生脂基因的表达,从而降低肥胖的生成,因此对相关的这些生脂基因的认知成为了前提条件。氧化型低密度脂蛋白受体1(oxidized low-density lipoprotein receptor1,OLR1)归属于哺乳类动物C型凝集素家族,对多个配体都有结合能力,有着复杂的生物学功能。在脂肪细胞中,OLR1的表达与脂肪酸的吸收、胆固醇转运及肥胖产生有关,但目前对OLR1在脂代谢方面的作用的研究还处于初级阶段,尤其对于OLR1基因在猪脂肪组织中的研究未见报道。因此本试验旨在克隆猪脂肪组织OLR1基因编码区全长序列,研究OLR1基因的序列特征、表达规律及可能的作用机理。主要结果如下: 1.猪脂肪组织OLR1基因编码区全长825bp,共编码273个氨基酸。与牛、人、大鼠、小鼠OLR1的同源性分别为84%、79%、51%、27%。OLR1蛋白含有1个跨膜螺旋,为2型膜蛋白,N端24-60位为信号肽区,144-265位C型凝集素区。 2.OLR1所归属的哺乳类动物C型凝集素家族基因密码子A+U含量远高于G+C含量(61.2%:38.8%),密码子的第三位偏向使用A/U结尾(占76.53%),并且偏向使用AGA、AGG、GCU等密码子,而极少使用UGG、CCG、CGC密码子。基因异质性分析显示该家族基因绝大多数聚为一类。 3.OLR1基因mRNA在皮下脂肪中的表达量显著高于内脏脂肪(p<0.01),并且随着发育时间呈显著增加趋势(p<0.01),脂肪型猪种脂肪组织中OLR1 mRNA表达量显著高于瘦肉型猪种(p<0.05)。在脂肪组织中,OLR1表达与PPAR72、FAS、SREBP-1c显著正相关(p<0.05),与TGH、C/EBPα相关性不显著。 4.在小鼠前体脂肪细胞分化过程中,短链脂肪酸(SCFA)处理组OLR1mRNA表达量显著低于对照组(p<0.05),长链脂肪酸(LCFA)处理组OLR1mRNA表达量显著高于对照组(p<0.05);当有P38MAPK抑制剂存在下,OLR1mRNA表达量显著低于正常水平(p<0.05),短链脂肪酸处理组OLR1mRNA表达量显著低于无抑制剂时的表达量(p<0.05),长链脂肪酸处理组OLR1mRNA表达量显著低于对照组(p<0.05)。 5.在小鼠前体脂肪细胞分化过程中,短链脂肪酸处理组细胞数量随分化时间显著降低(p<0.05),而长链脂肪酸处理组与对照组细胞数量无显著变化;短链和长链脂肪酸处理组PPARγ/2、C/EBPα、FAS、SREBP-lc mRNA表达量都显著高于对照组(p<0.05),而TGH变化不显著;当有P38MAPK.抑制剂存在时,PPARγ2、FAS和SREBP-1c tuRNA表达量显著低于对照组(p<0.05),而C/EBPα和TGH变化不显著。
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