绞股蓝中绞股蓝皂苷的分离纯化

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本论文主要研究了从中草药绞股蓝中提取绞股蓝皂苷,并采用柱层析法对绞股蓝总皂昔进行了分离纯化。然后以微生物酶法转化绞股蓝皂苷为目的,筛选出绞股蓝皂苷糖苷酶的产生菌种,并优化了其发酵条件。最后对绞股蓝皂苷糖苷酶的酶学性质进行了研究。采用单因素试验方法优化了绞股蓝皂苷的水提工艺,确定了水煮法提取绞股蓝粗皂苷的最佳工艺条件,是液汁比20:1的条件下水煮三小时和水煮三次,在该条件下提取绞股蓝总皂苷的得率为5.4%。用AB-8大孔吸附树脂脱糖、D-296离子交换树脂柱脱色和硅胶柱层析法对绞股蓝粗皂苷进行分离纯化。绞股蓝粗皂苷经过AB-8大孔吸附树脂脱糖、D-296离子交换树脂柱脱色后,制得的绞股蓝总皂苷得率为52.4%。硅胶柱层析法分离绞股蓝总皂苷,在洗脱比例V(氯仿):V(甲醇)=8.5:1.5下出现皂苷样品A和B,得率分别为1.2%、2.5%;在洗脱比例V(氯仿):V(甲醇)=8:2下出现皂苷样品C,得率为16.3%。以多糖基绞股蓝皂苷样品C为底物,从7种菌筛选出能产绞股蓝皂苷糖苷酶的菌种,最终确定Absidiasp.GYP4r菌株为产酶菌种,该菌在30℃的条件下发酵培养6天所得到的酶液对底物的水解能力最好,最佳的诱导物为20%绞股蓝。绞股蓝皂苷糖苷酶的最适pH和温度分别为pH5和50℃,该酶在pH4~6范围内以及在60℃以下时稳定。Na+、K+、Mg2+、Zn2+、Ca2+五种离子对该酶影响不大,Fe3+、Cu2+对该酶的酶活力有明显的的抑制作用;酶反应动力学研究表明,Vmax为3.3mmol/(L · h),Km为1.36mmol/L。相对分子质量75.9kDa。
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