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丙型肝炎病毒(Hepatitis C Virus,HCV)是一种主要通过血液传播,在全世界广泛流行的RNA病毒,可引起急、慢性肝炎,肝硬化和肝癌[1-3]。截止至2002年全球共有超过1.8亿人感染HCV[4],仅中国的发病率就高达3.2%,是HCV感染的高流行区[5]。因此控制HCV的传播已经成为一个相当严峻的全球性公共卫生问题。目前常规的HCV检测多以HCV抗体检测和HCV核酸检测为主[6,7],由于人体感染HCV后有72天左右的窗口期[8],在此期间抗体尚未达到试剂盒的可检测滴度,从而容易造成漏检,严重威胁用血安全[9];虽然HCV核酸检测可以有效缩短检测窗口期,但存在对操作人员要求高、检测过程复杂易污染、所用试剂和仪器价格昂贵等缺点,以致于不能广泛应用于血液样本的常规检测[7,10:。研究表明,HCV核心蛋白(core)在病毒颗粒复制表达时,将结合部分病毒RNA形成病毒的核衣壳[11-13],因此在一定条件下,HCV core蛋白的检测结果可用于预测HCV的核酸复制情况,不但可以达到简化检测方法、提高检测效率、有效缩短病毒检测的窗口期的目的,还可以反映患者体内HCV病毒复制情况,并作为评价临床HCV抗病毒治疗效果的指标[14,15]。本研究目的在于筛选出高灵敏性和特异性的HCV core单克隆抗体用以检测血清中的HCV core Ag,为HCV core Ag诊断试剂盒的研发奠定基础。通过对HCV core进行基因序列和蛋白结构分析,我们发现HCV core蛋白前1-120aa(氨基酸)包含了大多数core蛋白的保守性B细胞表位,其中21-40aa为其最具免疫原性的优势表位,且25-39aa表位与HCV阳性血清反应最好[16-25]。因此本实验以1b型HCVcore蛋白序列为参照,合成HCVcore21-40aa多肽蛋白,并在其羧基末端偶联载体蛋白钥孔戚血蓝素(keyhole limpet hemocyanin,KLH)作为目的蛋白,最终通过常规单抗制备技术和间接ELISA法筛选单抗,成功获得11株高亲和力的抗HCV core的单克隆抗体。ELISA结果表明这些抗体对合成多肽HCV core 21-40aa以及原核表达重组多肽HCV corel-120aa的反应性均为100%。免疫荧光方法证明这11株抗体对体外转染于Huh 7.5.1细胞内的2a型HCV病毒JFH-1的检出率为100%。我们用这些抗体分别通过蛋白质印迹法(Western blot,WB)检测3份HCV高病毒载量病人血浆,筛选出亲和力和灵敏性最佳的两株单克隆抗体(110F8和14B5),并将这两株抗体进一步用于60份血清样品的检测,检测结果与该60份血清样本的ELISA抗体法、巢式PCR、ROCHE荧光定量PCR的检测结果做对比。结果显示,单克隆抗体对HCV core Ag的WB检测结果与巢式PCR检测结果吻合度较强且具有统计学意义;单克隆抗体对HCV core Ag的WB检测结果与ELISA抗体法检测结果吻合度较强且具有统计学意义。以上结果皆证明单克隆抗体对天然core抗原具有较好的特异性和灵敏性。