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本研究从福建、广东和山东地区养鸭场的患病雏番鸭群中分离到5株病毒,经血凝、血凝抑制试验及RT-PCR方法检测,证明这5株分离株均为鸭源新城疫病毒,分别命名为FJ08、GD0901、GD1002、SD0901和SD1002。生物学特性检测结果表明,这5株鸭源新城疫病毒的MDT分别是72.8h、62.6h、56.0h、64.3h和62.6h;ICPI分别是0.60、1.56、1.64、1.25和1.54;IVPI分别是0.40、2.24、2.29、2.22和2.25。由此判定GD0901株、GD1002株和SD1002株均为NDV强毒株,FJ08株和SD0901株均为中等毒力毒株。
采用RT-PCR方法对这5株分离株的F基因和HN基因的全基因序列进行扩增和克隆,并进行测序分析。结果表明,5株分离株F蛋白裂解位点处的氨基酸序列为112RRQKRF117(GD1002株为:112RRQRRF117),均符合新城疫病毒中等毒力毒株及强毒株的分子特征,结合毒力测定结果判定FJ08株和SD0901株为中等毒力毒株,其余3株为强毒株。根据HN的氨基酸同源性,5株分离株HN基因长度均为1716bp,编码571个氨基酸,均属于C群,从基因长度上符合强毒株的特征。对这5株分离株和参考毒株的F基因47nt～420nt区域进行同源性比较,FJ08株属于基因Ⅵb型,GD1002株属于基因Ⅸ型,GD0901株、SD0901株、SD1002株均属于基因Ⅶd型。
利用本实验室保存的9对特异性引物,采用RT-PCR方法对GD1002株全基因组进行扩增和克隆,并进行测序分析。拼接后,GD1002株基因组全长为15192nt,基因组长度符合“六碱基法则”。基因组包含6个开放阅读框,从cDNA5’～3’方向各开放阅读框长度分别为:1470nt、1188nt、1095nt、1662nt、1716nt和6615nt,分别编码NP、P、M、F、HN和L六种蛋白。基因组3Leader由55个核苷酸组成,5Trailer由114个核苷酸组成。
相似性和遗传进化分析结果表明对于NP、P、M、F和L基因,GD1002株与我国特有基因Ⅸ型F48E8株和JS/1/02/Du株有较近的亲缘关系;而对于HN基因,GD1002株则与基因Ⅵ型NDV毒株1083(Fontana)/72株、Italy/2736株、IT-227株和NDV05-029株亲缘关系较近,推测GD1002株可能是基因Ⅸ型与基因Ⅵ型毒株的重组株。
选取基因Ⅸ型毒株GD1002进行人工感染试验。接种25d雏番鸭后,肌注组的发病率和死亡率均为100％,点眼、滴鼻、口服组的发病率和死亡率分别为为80%和40%;接种30 d雏鸡后,肌注组的发病率和死亡率均为100%,点眼、滴鼻、口服组的发病率和死亡率分别为90%和60%。试验鸭和鸡均表现出与自然感染病例相似的临床症状和病理变化。