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阴离子交换蛋白1(anion exchanger,AE1)又名带3蛋白,在体内通过介导Cl-和HCO3-的跨膜交换调节细胞内pH值和离子稳态。我们曾首次报道AE1 C末端与肿瘤抑制蛋白p16直接相互作用,且二者在胃癌细胞中表达和定位异常。进一步临床资料分析显示AE1和p16的异常表达与胃癌的发生发展密切相关。
胃泌素是一种主要由胃肠道G细胞分泌的多肽激素,具有刺激胃酸分泌和营养胃肠粘膜的作用。近年的研究表明,胃泌素影响胃肠肿瘤细胞的生长,但结果存在很大争议,我们推测胃泌素可能通过AE1/p16信号通路发挥作用。为深入研究AE1、p16及胃泌素三者在胃癌发生中的关系及其病理学意义,本研究首先利用免疫组化法检测了189例胃癌组织p16的表达,结果显示,相对于癌旁组织,在胃癌细胞胞浆中p16的表达呈阳性,p16蛋白的阳性表达率随着胃体癌的进展而显著下降、随着胃窦癌的进展而上升。通过对44例胃窦癌患者组织病理学研究发现,在所有癌组织中胃泌素的表达呈阴性,在早期癌旁组织中胃泌素的表达阳性率为72.7％,晚期为13.6％,胃泌素与胃癌细胞浆内p16的表达呈负相关。体外实验证实胃泌素抑制胃癌SGC7901细胞p16的表达,并呈时间和剂量依赖性。荧光素酶实验证明胃泌素作用p16启动子的区域大约定位在-623～426之间,说明胃泌素通过调节p16启动子活性抑制其表达。进一步研究发现,p16蛋白的下调导致AE1稳定性下降,说明p16与AE1在细胞浆内相互作用提高了AE1蛋白的稳定性。MTT实验显示10-7mol/L和10-10mol/l胃泌素刺激5天后胃癌细胞活力开始下降,10天后与对照组比较差异显著,细胞周期阻滞在S期。采用RNAi技术稳定阻断AE1和p16的表达,胃癌细胞增殖同样受到明显抑制。动物实验发现,系统性高胃泌素血症显著抑制裸鼠胃癌种植瘤的生长,降低p16和AE1的表达,与利用AE1特异性的siRNA抑制种植瘤生长的效果一致。