【摘 要】
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手足口病是一种以婴幼儿发病为主的急性传染病。可由多种肠道病毒引起，其中以柯萨奇病毒A16型(Coxsackievirus A16，CVA16)和人肠道病毒71型(Enterovirus71，EV71)最为常见。相较
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手足口病是一种以婴幼儿发病为主的急性传染病。可由多种肠道病毒引起，其中以柯萨奇病毒A16型(Coxsackievirus A16，CVA16)和人肠道病毒71型(Enterovirus71，EV71)最为常见。相较于CVA16，EV71感染可引起多种神经系统相关性疾病甚至导致患儿死亡，严重危害了儿童的生命健康。目前还未有有效的预防手段。基于病毒样颗粒的基因工程疫苗因具有完整的免疫原性和较高的安全性近年来在EV71病毒预防性疫苗研究领域受到关注。另外由于EV71病毒基因多态性强且具有较高的突变率，因此，针对EV71不同基因型设计具有交叉保护作用的广谱疫苗是疫苗研发的关键问题之一。目前利用保守多肽制备广谱疫苗已经成为拮抗具有较高突变能力的病毒的新策略。 本课题运用大肠杆菌表达系统表达嵌合EV71（C4亚型）VP4保守多肽的HBcAg融合蛋白，并对融合蛋白自组装形成的病毒样颗粒的免疫效果及中和EV71病毒的活性进行评价。首先利用全基因合成技术，分别合成HBcAg基因和HBcAg嵌合单个或3个拷贝的EV71 VP4N-末端保守多肽的融合基因。将融合基因在大肠杆菌BL21中表达并采用镍柱亲和层析方法对其进行纯化，再通过Western-blot、负染电镜观察等方法检测目的蛋白的表达，最后将VLP结合佐剂免疫小鼠后，收集血清利用ELISA及中和实验检测其中和免疫效果。 实验结果表明，在大肠杆菌中高效表达了重组蛋白并且成功自组装成病毒样颗粒。得到的重组蛋白颗粒能够诱导产生中和EV71病毒抗体反应;3个拷贝免疫组诱导识别EV71特异性多肽的抗体滴度略高于单拷贝组;两种嵌合蛋白诱导的中和EV71病毒的抗体滴度相似;两种嵌合病毒样颗粒都能引起针对EV71BrCr和Bj08菌株的交叉保护反应。
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