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目的:探讨吲哚胺2,3双加氧酶(Indoleamine 2,3-dioxygenase,IDO)在烟曲霉菌性角膜炎中对巨噬细胞募集、吞噬和极化的影响。方法:本实验分别在烟曲霉菌感染的细胞模型以及烟曲霉菌性角膜炎小鼠动物模型上研究了IDO对烟曲霉菌性角膜炎角膜感染程度的影响,以及IDO调控巨噬细胞募集、吞噬和极化功能的相关机制。据此,本研究从三个方面加以证实:1、将C57BL/6小鼠随机分为损伤对照组(PBS灌胃预处理,刮除约占角膜面积的1/2～2/3的中央角膜上皮,覆盖角膜接触镜)、1-MT组(IDO的抑制剂1-MT灌胃预处理,刮取约占角膜面积的1/2～2/3的中央角膜上皮,覆盖角膜接触镜)、感染组(PBS灌胃预处理,刮除约占角膜面积1/2～2/3的角膜上皮后涂抹烟曲霉菌,盖角膜接触镜)、1-MT+感染组(1-MT灌胃预处理,刮除角膜上皮后涂抹烟曲霉菌,盖角膜接触镜),感染烟曲霉菌后第3天在裂隙灯下观察各组小鼠角膜感染情况,通过裂隙灯照相、临床炎症评分明确小鼠角膜疾病的严重程度。应用免疫荧光染色来确定各组小鼠角膜中巨噬细胞的定位以及募集数量。取C57BL/6小鼠腹腔巨噬细胞与等量的烟曲霉分生孢子共培养,将其分为空白对照组、正常组、1-MT(1mM)组和IFNG(400U/ml)组,采用烟曲霉菌落形成单位(CFU)的计数方法定量检测各组巨噬细胞的吞噬功能。2、采用RT-PCR检测损伤对照组、1-MT组、感染组、1-MT+感染组的小鼠角膜中巨噬细胞相关细胞因子(M1型:TNF-a、iNOS;M2型:Arg-1、IL-10)mRNA表达的水平,并采用流式细胞术检测各组小鼠角膜和脾中CD206+/CD86+巨噬细胞比例的变化。采用RT-PCR检测烟曲霉灭活菌丝刺激不同时间点的小鼠腹腔巨噬细胞中IDO mRNA的表达。使用1-MT(1mM)和IFNG(400U/ml)分别预处理小鼠腹腔巨噬细胞2小时,采用RT-PCR检测烟曲霉灭活菌丝刺激8小时后各组巨噬细胞相关细胞因子(M1型:TNF-a、iNOS;M2型:Arg-1、IL-10)mRNA的表达变化。3、采用蛋白质免疫印迹检测损伤对照组、1-MT组、感染组、1-MT+感染组的小鼠角膜中p38和ERK蛋白的表达。使用1-MT、IFNG、p38抑制剂(SB203580)、ERK抑制剂(U0126)分别预处理小鼠腹腔巨噬细胞2小时,流式细胞术检测烟曲霉菌灭活菌丝刺激8小时后各组CD206+/CD86+巨噬细胞比例的变化。结果:1.与正常组的小鼠角膜相比,感染组的角膜中巨噬细胞募集的数量增加。1-MT+感染组与感染组相比,小鼠角膜病变程度加重,巨噬细胞募集数量增加;与正常组相比,IFNG抑制了小鼠腹腔巨噬细胞对烟曲霉孢子的吞噬作用。2.与感染组相比,1-MT+感染组的小鼠角膜中M1型巨噬细胞炎症因子TNF-α、iNOS mRNA表达明显降低,M2型巨噬细胞炎症因子Arg-1、IL-10 mRNA表达升高,小鼠角膜和脾中CD206+/CD86+巨噬细胞比例增高;IDO mRNA在烟曲霉灭活菌丝刺激小鼠腹腔巨噬细胞8小时后表达达高峰;烟曲霉菌刺激小鼠腹腔巨噬细胞8小时后,IFNG明显促进TNF-α、iNOS mRNA表达,抑制Arg-1、IL-10 mRNA表达,1-MT促进Arg-1、IL-10 mRNA表达。3.与感染组相比,1-MT+感染组的小鼠角膜中p-p38、p-erk蛋白表达水平下调;烟曲霉灭活菌丝刺激8小时的小鼠腹腔巨噬细胞,经IFNG预处理后CD206+/CD86+巨噬细胞比例下调,经1-MT预处理后CD206+/CD86+巨噬细胞比例上调,此外,IFNG对CD206+/CD86+巨噬细胞比例的影响被p38和ERK的蛋白抑制剂逆转。结论:IDO介导的抗烟曲霉菌的保护性免疫耐受是通过抑制巨噬细胞的募集和吞噬功能产生的。此外,IDO通过MAPK/ERK依赖途径促进了烟曲霉菌性角膜炎中巨噬细胞向M1型的极化。