【摘 要】
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目的:PC-1基因是在骨转移和雄激素非依赖性的前列腺癌细胞中异常高表达的新基因.该研究拟建立稳定表达外源PC-1基因的小鼠成纤维细胞株,为进一步研究PC-1基因的生物学功能提
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目的:PC-1基因是在骨转移和雄激素非依赖性的前列腺癌细胞中异常高表达的新基因.该研究拟建立稳定表达外源PC-1基因的小鼠成纤维细胞株,为进一步研究PC-1基因的生物学功能提供实验材料.在此基础上通过体内、体外实验,观察PC-1基因的表达对NIH3T3细胞生物学特性的影响,探讨它与细胞转化、肿瘤形成的关系,为进一步研究PC-1基因与前列腺癌的发生发展关系提供实验依据和理论基础.结论:1.采用巢式PCR技术,从原始克隆质粒pZHR3,扩增出人PC-1全长693bp cDNA片段(包括保护性碱基、酶切位点和CCACC序列在内),并构建了含此片段的真核表达载体pcDNA3.1(-)/myc-his-pc-1.2.利用脂质体介导法将重组质粒pcDNA3.1(-)/myc-his-pc-1转染入小鼠成纤维细胞NIH3T3,经G418筛选获得阳性细胞克隆.3.经PCR鉴定外源PC-1基因已经整合至NIH3T3细胞,RT-PCR及Western blot技术证实,外源PC-1基因已在靶细胞中稳定转录并有效翻译.4.外源PC-1基因在NIH3T3细胞中的稳定表达,对NIH3T3细胞在体内体外增殖均有促进作用,能够引起细胞恶性转化.软琼脂克隆形成试验和裸鼠致瘤性实验结果证实,转染PC-1基因的NIH3T3细胞获得了非锚定依赖性生长能力,在软琼脂中形成集落;接种裸鼠后,使裸鼠致瘤.
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