论文部分内容阅读
胃癌（gastric cancer,GC）是临床上常见的恶性肿瘤之一,在我国某些地区己居全部恶性肿瘤死亡原因的首位。现代医学认为饮食腌盐食物产生亚硝酸盐,烧烤烟熏食品产生3-4苯丙吡与胃癌高发病有关。免疫监视失控和免疫功能低下也是主要原因之一。胃癌的治疗以包括手术,化疗、生物治疗、中药治疗等在内的综合治疗为主,其中以5-氟尿嘧啶（5-Fu）、丝裂霉素（MMC）、阿霉素（ADM）为基础用药的化疗是胃癌综合治疗的重要组成部分,但其骨髓毒性、肝肾毒性及胃肠道反应等副作用较大,总有效率仍不尽如人意。另外,在肿瘤的化疗过程中所出现的耐药现象也是困扰肿瘤治疗的一大难题,常常导致化疗的失败。中草药治疗癌症以其毒性低,有一定疗效而日益引起人们的重视。近年来科学工作者对中草药抗肿瘤机理的研究逐渐深入,越来越多的有效组分被分离出来,并在不同水平上对抗病机理进行了研究。寻找新的天然抗肿瘤药物已成为一研究热点。丹皮酚（Paeonol, Pae）又称牡丹酚,是毛莨科植物牡丹Paeonia Suffruicosa Andr.根皮和萝摩科植物徐长卿Pycnostelma Paniculatum （Bunge） K. Schum干燥根或全草的主要有效成分。现代药理研究表明,Pae具有镇静催眠、解热镇痛、抗菌消炎、免疫调节、抗氧化及保护心脑血管等广泛的药理活性。早期研究发现,Pae对体外培养的多种肿瘤细胞的增殖有较强的抑制作用,体内应用有抗肿瘤作用。本研究选用人胃癌细胞株SGC-7901和小鼠前胃癌细胞MFC作为研究对象,观察不同浓度Pae对人胃癌细胞增殖及荷瘤小鼠MFC肿瘤生长的抑制作用并探讨其可能机制,为将Pae应用于胃癌的治疗提供初步的实验依据。1 Pae对人胃癌细胞株SGC-7901和小鼠前胃癌细胞株MFC增殖的影响选用对数生长期人胃癌细胞株SGC-7901和小鼠前胃癌细胞MFC,采用MTT法检测了Pae体外抑制人和小鼠胃癌细胞株增殖的量效和时效关系。结果显示:⑴Pae(7.81～250 mg·L-1)对上述两种细胞均有增殖抑制作用,药物浓度越高,抑制作用越强,呈现明显的剂量效应关系。以浓度的对数与抑制率进行直线相关分析:SGC-7901:r=0.9800,P<0.01;MFC:r=0.9883,P<0.01,IC50值分别为SGC-7901:82.60 mg·L-1,MFC:60.10mg·L-1。2 Pae对荷瘤小鼠MFC肿瘤的体内抗肿瘤作用Pae灌胃给药对模型小鼠MFC肿瘤的生长有明显抑制作用。在100mg·kg-1·d-1×10d剂量下抑瘤率为37%左右,当剂量增至400 mg·kg-1·d-1×10d时抑瘤率高达54%其中100和200mg·kg-1·d-1剂量组死亡4只,400mg·kg-1·d-1剂量组各死亡6只,5-FU对照组死亡1只。用药后小鼠体重均有增加,未见明显毒副作用,表明Pae在本实验条件下具有良好的安全性。3 pae诱导肿瘤细胞调亡3.1 pae诱导肿瘤细胞调亡的形态学观察采用吖啶橙（acridine orange, AO）荧光染色,观察细胞的形态学改变。在荧光显微镜下可见未处理的肿瘤细胞增殖旺盛,细胞质和核仁内有大量RNA,被染为桔黄或桔红色荧光,细胞核中有大量DNA,表现为黄绿色荧光深浅不一的结构样特征;药物处理组作用24h后,细胞密度减少,并可见典型的凋亡细胞形态特征:核固缩、体积缩小和表面起泡,细胞核或细胞质内可见致密浓染的黄绿色荧光。3.2 pae诱导肿瘤细胞调亡的流式细胞仪分析应用流式细胞仪（Flow Cytometry, FCM）检测细胞凋亡率。Pae在7.81～125mg·L-1浓度下均可诱导人胃癌SGC-7901细胞和小鼠前胃癌MFC细胞发生凋亡,在DNA直方图上G0/G1期前可见亚G1峰即凋亡峰,其诱导凋亡作用呈现明显的浓度依赖关系。提示诱导肿瘤细胞调亡,可能是Pae抗肿瘤作用的重要机制。4 Pae诱导肿瘤细胞调亡的可能分子机制采用免疫组化S-P法分别检测SGC-7901细胞、MFC细胞及荷瘤小鼠MFC肿瘤细胞调亡相关蛋白bcl、bax的表达,用江苏捷达形态学图像分析系统分析检测结果,发现pae可上调bax、下调bcl-2表达。表明其诱导肿瘤细胞凋亡与调节调亡相关蛋白的表达有关。5结论本文研究结果表明,Pae对人胃癌细胞株SGC-7901和小鼠前胃癌细胞株MFC有增殖抑制作用,灌胃给药有抗肿瘤作用。且呈明显的剂量依赖关系;其作用机制可能与其诱导肿瘤细胞调亡有关。