【摘 要】
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本论文对动物性食品中禁用药物盐酸克伦特罗的化学发光酶免疫分析方法进行了深入系统的研究。研究了小分子半抗原与载体蛋白结合的方法,最终采用重氮盐法制备出盐酸克伦特罗
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本论文对动物性食品中禁用药物盐酸克伦特罗的化学发光酶免疫分析方法进行了深入系统的研究。研究了小分子半抗原与载体蛋白结合的方法,最终采用重氮盐法制备出盐酸克伦特罗的人工免疫原、包被原和酶标抗原,用此人工免疫原免疫新西兰大白兔,制备出高效价和高特异性的盐酸克伦特罗抗体。通过优化各项实验条件,建立了简便、快捷、实用的盐酸克伦特罗直接竞争化学发光酶免疫分析方法。对所建立方法的性能指标进行了系统评价,考察了方法检测限、定量限、精密度、准确度。该方法检测灵敏度较高,灵敏度(IC50)为0.25μg/kg,检测限(IC15)为0.02μg/kg,批间和批内变异系数均小于20%。以猪肉和鸡肉为例,研究了肉类食品的基质对方法影响的消除方法。两种肉类食品中的盐酸克伦特罗用高氯酸溶液提取,经过固相萃取(SPE)C18小柱净化即可有效消除基质影响。测定了0.1μg/kg、1μg/kg、5μg/kg三个浓度的添加回收率,回收率在80%～100%之间。同时建立了盐酸克伦特罗的直接竞争酶联免疫法(ELISA),灵敏度(IC50)为1.0μg/kg,检测限(IC1)为0.1μg/kg。分析了化学发光酶免疫法和直接竞争酶联免疫法的相关性,线性相关系数R2值为0.999。通过高效液相色谱法,对建立的盐酸克伦特罗化学发光酶免疫分析方法的准确性进行了验证。两种方法检测结果的一致性很高,线性相关系数R2值0.9647,说明所建立的化学发光酶免疫分析方法准确可靠。本实验对抗体和酶标抗原的稳定性进行了测试,结果表明两种试剂稳定性较好,在4℃条件下放置6个月可保证检测结果的可靠性,为进一步研制盐酸克伦特罗残留快速检测试剂盒奠定了基础。
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