【摘 要】
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根据RNAi技术原理,设计构建shRNA表达载体,并对该载体在细胞水平及乳鼠体内对口蹄疫病毒的复制与感染[0]的抑制进行了研究,以期筛选到对口蹄疫病毒有良好抑制作用的干扰靶位
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根据RNAi技术原理,设计构建shRNA表达载体,并对该载体在细胞水平及乳鼠体内对口蹄疫病毒的复制与感染[0]的抑制进行了研究,以期筛选到对口蹄疫病毒有良好抑制作用的干扰靶位。本研究以口蹄疫病毒WFL株为研究样本,针对口蹄疫病毒基因组高度保守的IRES、2B、2C和3D区段,选取了19个干扰靶位,构建了包括对照在内的20个shRNA表达质粒;在细胞水平研究表明,针对2B基因的shRNA表达质粒对pEGFP+2B的融合表达有明显抑制作用;细胞攻毒实验证实,pSi-2B16、pSi-2C56和pSi-3D18能够明显抑制口蹄疫病毒在BHK-21、PK-15和IBRS-2三种细胞中复制,最高抑制效率达90%以上,抑制作用最长持续时间可达144h;乳鼠动物模型实验证实,三种质粒单独应用最高可以使50%的3日龄乳鼠耐过50LD50/只剂量的病毒攻击,而且质粒诱导的对病毒感染的抑制作用可以在攻毒后24h内发挥保护效力,但攻毒后应用效果不明显;实验还证明,加大质粒注射剂量和质粒的联合应用能够明显提高对乳鼠的保护率,耐过乳鼠无不良反应,与感染对照组相比,病毒RNA相对表达率最低为0.052%,内脏病变轻微或不呈现病理变化。本研究对应用RNAi技术抑制口蹄疫病毒在体内外的复制进行了成功探索,为RNAi技术在口蹄疫病毒研究和口蹄疫防治中的运用奠定了基础。
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