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目的：
探究顺式阿曲库铵对机械通气大鼠膈肌的影响及其可能的分子机制。
方法：
第一部分
将18只成年雄性SD大鼠随机分为3组：（1）对照组（CON, n=6），禁食30 h；（2）机械通气组（MV，n=6），禁食6 h后进行机械通气24 h，同时持续泵入戊巴比妥钠（10 mg.kg-1.h-1）维持麻醉；（3）机械通气+顺式阿曲库铵组（MVC，n=6），禁食6 h后进行机械通气24 h，同时持续泵入戊巴比妥钠（10 mg.kg-1.h-1）+顺式阿曲库铵。机械通气24 h后取肋膈肌，通过HE染色测量膈肌纤维横截面积（Cross-sectional area, CSA），免疫组化检测检测慢速型肌球蛋白重链（Anti-Slow Skeletal Myosin Heavy chain，MHC-I），蛋白免疫印迹法（Western blotting， WB）检测肌肉萎缩相关的两种蛋白：膈肌肌肉萎缩盒F基因（Muscle atrophy F-box，MAFbx）、肌肉特异性环指蛋白1（Muscle specific ring finger1，MURF1）。
第二部分
将30只成年雄性SD大鼠随机分为5组：（1）对照组（CON，n=6），禁食30 h；（2）机械通气组（MV，n=6），禁食6 h后机械通气24 h，同时持续泵入戊巴比妥钠（10 mg.kg-1.h-1）维持麻醉；（3）机械通气+顺式阿曲库铵组（MVC，n=6），禁食6 h后机械通气24 h，同时持续泵入戊巴比妥钠（10 mg.kg-1.h-1）+顺式阿曲库铵；（4）机械通气+氯喹（chloroquine, CQ）组（QMV,n=6），机械通气前24 h和前30 min腹腔注射自噬抑制剂CQ30mg.kg-1，其余操作同MV组；（5）械通气+顺式阿曲库铵+CQ组（QMVC,n=6），机械通气前24 h和前30 min腹腔注射CQ30mg.kg-1，其余操作同MVC组。机械通气24 h后取肋膈肌，经HE染色测量各组膈肌CSA， WB检测两种萎缩相关蛋白，免疫荧光染色观察TOM20（线粒体外膜蛋白）和LC3（自噬小体蛋白）共表达的线粒体及LC3的表达；扫描电镜观察线粒体和自噬小体的超微结构；WB检测线粒体自噬相关蛋白PTEN诱导的推定激酶1（PTEN induced putative kinase1， PINK1）、Parkin、选择性自噬接头蛋白P62/sequestosome-1（SQSTM1）和LC3II/I蛋白的表达水平。
结果：
第一部分
（1）3组大鼠解剖时动脉血的PH、PaO2、PaCO2的结果均在正常范围内，各组间的血气分析及戊巴比妥钠用量统计结果未见明显差异（P＞0.05）。
（2）MV组和CON组相比，膈肌纤维CSA减小，差异有统计学意义（P＜0.05），MVC组和CON组相比，膈肌纤维CSA减小，差异有统计学意义（P＜0.05），MVC组和MV组相比膈肌纤维CSA减小，差异有统计学意义（P＜0.05）。
（3）MV组和CON组相比，MHC-I和MHC-II的CSA减少,差异有统计学意义（P＜0.05），两类肌纤维的数量比例和所占面积比例相比，差异无统计学意义（P＞0.05）；MVC组和CON组相比，MHC-I和MHC-II的CSA减少,差异有统计学意义（P＜0.05），两类肌纤维的数量比例和所占面积比例相比，差异无统计学意义（P＞0.05）；MVC组和MV组相比， MHC-I和MHC-II的CSA减少,差异有统计学意义（P＜0.05），两类肌纤维的数量比例和所占面积比例相比，差异无统计学意义（P＞0.05）。
（4）MV组和CON组相比，MAFbx和MURF-1蛋白的表达量增加，差异有统计学意义（P＜0.05）；MVC组和CON组相比，MAFbx和MURF-1蛋白的表达量增加，差异有统计学意义；MVC组和MV组相比，MAFbx和MURF-1蛋白的表达量增加，差异有统计学意义。
第二部分
（1）5组大鼠解剖时动脉血的PH、PaO2、PaCO2的结果均在正常范围内，各组间的血气分析、戊巴比妥钠、顺式阿曲库铵用量统计结果未见明显差异（P＞0.05）。
（2）QMV组和MV组相比，膈肌纤维CSA增大，差异有统计学意义（P＜0.05），QMVC组和MVC组相比，膈肌纤维CSA增大，差异有统计学意义（P＜0.05），QMVC组、QMV组、CON组三组相比，差距无统计学意义（P＞0.05）。
（3）QMV组和MV组相比，MAFbx和MURF-1蛋白的表达量减少，差异有统计学意义（ P＜0.05）；QMVC组和MVC组相比， MAFbx和MURF-1蛋白的表达量减少，差异有统计学意义；QMVC组、QMV组、CON组三组相比，差距无统计学意义（P＞0.05）。
（4）MV组和CON组相比，TOM20和LC3的共表达的线粒体数量增加，LC3表达增加，差异有统计学意义（P＜0.05）；MVC组和CON组相比，TOM20和LC3的共表达的线粒体数量增加，LC3表达增加，差异有统计学意义（P＜0.05；MVC组和MV组相比，TOM20和LC3的共表达的线粒体数量增加，LC3表达增加，差异有统计学意义（P＜0.05）。QMV组和MV组相比，TOM20和LC3的共表达的线粒体数量减少，LC3表达减少，差异有统计学意义（P＜0.05）；QMVC组和MVC组相比，TOM20和LC3的共表达的线粒体数量减少，LC3表达减少，差异有统计学意义（P＜0.05）；QMVC组、QMV组、CON组三组相比，差距无统计学意义（P＞0.05）。
（5）MV组和CON组相比，线粒体出现轻度肿胀，出现较少量自噬和少量脂滴；MVC组和CON组相比，自噬增多，线粒体肿胀加剧；MVC组和MV组相比，自噬增多，线粒体肿胀加剧。QMV组和MV组相比，线粒体肿胀好转，自噬减少；QMVC组和MVC组相比，线粒体肿胀好转，自噬减少；QMVC组、QMV组、CON组三组相比，无明显变化。
（6）MV组和CON组相比，PINK1、Parkin、LC3II/I蛋白的表达量增加，P62蛋白的表达下降，差异有统计学意义（P＜0.05）；MVC组和CON组相比，PINK1、Parkin、LC3II/I蛋白的表达量增加，P62蛋白的表达下降，差异有统计学意义（P＜0.05；MVC组和MV组相比，PINK1、Parkin、LC3II/I蛋白的表达量增加，P62蛋白的表达下降，差异有统计学意义（P＜0.05）。QMV组和MV组相比，PINK1、Parkin、LC3II/I蛋白的表达量下降，P62蛋白的表达量增加，差异有统计学意义（P＜0.05）；QMVC组和MVC组相比，PINK1、Parkin、LC3II/I蛋白的表达量下降，P62蛋白的表达量增加，差异有统计学意义（P＜0.05）；QMVC组、QMV组、CON组三组相比，差距无统计学意义（P＞0.05）。
结论：
（1）长时间机械通气可引起SD大鼠膈肌萎缩，MCH-I和MCH-II两种纤维类型均发生萎缩，且数量和面积占比不发生改变；
（2）顺式阿曲库铵可加重机械通气所致的膈肌萎缩，可能是通过AL途径且与PINK1-Parkin介导的线粒体自噬途径有关；
（3）CQ可阻断AL途径，改善顺式阿曲库铵引起的膈肌萎缩。
探究顺式阿曲库铵对机械通气大鼠膈肌的影响及其可能的分子机制。
方法：
第一部分
将18只成年雄性SD大鼠随机分为3组：（1）对照组（CON, n=6），禁食30 h；（2）机械通气组（MV，n=6），禁食6 h后进行机械通气24 h，同时持续泵入戊巴比妥钠（10 mg.kg-1.h-1）维持麻醉；（3）机械通气+顺式阿曲库铵组（MVC，n=6），禁食6 h后进行机械通气24 h，同时持续泵入戊巴比妥钠（10 mg.kg-1.h-1）+顺式阿曲库铵。机械通气24 h后取肋膈肌，通过HE染色测量膈肌纤维横截面积（Cross-sectional area, CSA），免疫组化检测检测慢速型肌球蛋白重链（Anti-Slow Skeletal Myosin Heavy chain，MHC-I），蛋白免疫印迹法（Western blotting， WB）检测肌肉萎缩相关的两种蛋白：膈肌肌肉萎缩盒F基因（Muscle atrophy F-box，MAFbx）、肌肉特异性环指蛋白1（Muscle specific ring finger1，MURF1）。
第二部分
将30只成年雄性SD大鼠随机分为5组：（1）对照组（CON，n=6），禁食30 h；（2）机械通气组（MV，n=6），禁食6 h后机械通气24 h，同时持续泵入戊巴比妥钠（10 mg.kg-1.h-1）维持麻醉；（3）机械通气+顺式阿曲库铵组（MVC，n=6），禁食6 h后机械通气24 h，同时持续泵入戊巴比妥钠（10 mg.kg-1.h-1）+顺式阿曲库铵；（4）机械通气+氯喹（chloroquine, CQ）组（QMV,n=6），机械通气前24 h和前30 min腹腔注射自噬抑制剂CQ30mg.kg-1，其余操作同MV组；（5）械通气+顺式阿曲库铵+CQ组（QMVC,n=6），机械通气前24 h和前30 min腹腔注射CQ30mg.kg-1，其余操作同MVC组。机械通气24 h后取肋膈肌，经HE染色测量各组膈肌CSA， WB检测两种萎缩相关蛋白，免疫荧光染色观察TOM20（线粒体外膜蛋白）和LC3（自噬小体蛋白）共表达的线粒体及LC3的表达；扫描电镜观察线粒体和自噬小体的超微结构；WB检测线粒体自噬相关蛋白PTEN诱导的推定激酶1（PTEN induced putative kinase1， PINK1）、Parkin、选择性自噬接头蛋白P62/sequestosome-1（SQSTM1）和LC3II/I蛋白的表达水平。
结果：
第一部分
（1）3组大鼠解剖时动脉血的PH、PaO2、PaCO2的结果均在正常范围内，各组间的血气分析及戊巴比妥钠用量统计结果未见明显差异（P＞0.05）。
（2）MV组和CON组相比，膈肌纤维CSA减小，差异有统计学意义（P＜0.05），MVC组和CON组相比，膈肌纤维CSA减小，差异有统计学意义（P＜0.05），MVC组和MV组相比膈肌纤维CSA减小，差异有统计学意义（P＜0.05）。
（3）MV组和CON组相比，MHC-I和MHC-II的CSA减少,差异有统计学意义（P＜0.05），两类肌纤维的数量比例和所占面积比例相比，差异无统计学意义（P＞0.05）；MVC组和CON组相比，MHC-I和MHC-II的CSA减少,差异有统计学意义（P＜0.05），两类肌纤维的数量比例和所占面积比例相比，差异无统计学意义（P＞0.05）；MVC组和MV组相比， MHC-I和MHC-II的CSA减少,差异有统计学意义（P＜0.05），两类肌纤维的数量比例和所占面积比例相比，差异无统计学意义（P＞0.05）。
（4）MV组和CON组相比，MAFbx和MURF-1蛋白的表达量增加，差异有统计学意义（P＜0.05）；MVC组和CON组相比，MAFbx和MURF-1蛋白的表达量增加，差异有统计学意义；MVC组和MV组相比，MAFbx和MURF-1蛋白的表达量增加，差异有统计学意义。
第二部分
（1）5组大鼠解剖时动脉血的PH、PaO2、PaCO2的结果均在正常范围内，各组间的血气分析、戊巴比妥钠、顺式阿曲库铵用量统计结果未见明显差异（P＞0.05）。
（2）QMV组和MV组相比，膈肌纤维CSA增大，差异有统计学意义（P＜0.05），QMVC组和MVC组相比，膈肌纤维CSA增大，差异有统计学意义（P＜0.05），QMVC组、QMV组、CON组三组相比，差距无统计学意义（P＞0.05）。
（3）QMV组和MV组相比，MAFbx和MURF-1蛋白的表达量减少，差异有统计学意义（ P＜0.05）；QMVC组和MVC组相比， MAFbx和MURF-1蛋白的表达量减少，差异有统计学意义；QMVC组、QMV组、CON组三组相比，差距无统计学意义（P＞0.05）。
（4）MV组和CON组相比，TOM20和LC3的共表达的线粒体数量增加，LC3表达增加，差异有统计学意义（P＜0.05）；MVC组和CON组相比，TOM20和LC3的共表达的线粒体数量增加，LC3表达增加，差异有统计学意义（P＜0.05；MVC组和MV组相比，TOM20和LC3的共表达的线粒体数量增加，LC3表达增加，差异有统计学意义（P＜0.05）。QMV组和MV组相比，TOM20和LC3的共表达的线粒体数量减少，LC3表达减少，差异有统计学意义（P＜0.05）；QMVC组和MVC组相比，TOM20和LC3的共表达的线粒体数量减少，LC3表达减少，差异有统计学意义（P＜0.05）；QMVC组、QMV组、CON组三组相比，差距无统计学意义（P＞0.05）。
（5）MV组和CON组相比，线粒体出现轻度肿胀，出现较少量自噬和少量脂滴；MVC组和CON组相比，自噬增多，线粒体肿胀加剧；MVC组和MV组相比，自噬增多，线粒体肿胀加剧。QMV组和MV组相比，线粒体肿胀好转，自噬减少；QMVC组和MVC组相比，线粒体肿胀好转，自噬减少；QMVC组、QMV组、CON组三组相比，无明显变化。
（6）MV组和CON组相比，PINK1、Parkin、LC3II/I蛋白的表达量增加，P62蛋白的表达下降，差异有统计学意义（P＜0.05）；MVC组和CON组相比，PINK1、Parkin、LC3II/I蛋白的表达量增加，P62蛋白的表达下降，差异有统计学意义（P＜0.05；MVC组和MV组相比，PINK1、Parkin、LC3II/I蛋白的表达量增加，P62蛋白的表达下降，差异有统计学意义（P＜0.05）。QMV组和MV组相比，PINK1、Parkin、LC3II/I蛋白的表达量下降，P62蛋白的表达量增加，差异有统计学意义（P＜0.05）；QMVC组和MVC组相比，PINK1、Parkin、LC3II/I蛋白的表达量下降，P62蛋白的表达量增加，差异有统计学意义（P＜0.05）；QMVC组、QMV组、CON组三组相比，差距无统计学意义（P＞0.05）。
结论：
（1）长时间机械通气可引起SD大鼠膈肌萎缩，MCH-I和MCH-II两种纤维类型均发生萎缩，且数量和面积占比不发生改变；
（2）顺式阿曲库铵可加重机械通气所致的膈肌萎缩，可能是通过AL途径且与PINK1-Parkin介导的线粒体自噬途径有关；
（3）CQ可阻断AL途径，改善顺式阿曲库铵引起的膈肌萎缩。