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第一部分脓毒症ARDS患者病程不同时期肺泡巨噬细胞蛋白质组学的变化 背景与目的：急性呼吸窘迫综合征(acute respiratory distresssyndrome，ARDS)是一种肺内过度性、失控性的炎症反应，多种炎症细胞和炎症介质是ARDS发生发展的关键因素。肺泡巨噬细胞(alveolar macrophage，AM)是机体重要的炎性细胞，通过研究在ARDS病程不同时期中AM蛋白质表达的变化，可能为阐明ARDS发病机理提供新的线索和思路。 方法：以14个继发于脓毒血症的ARDS患者为研究对象，分别于并发中度ARDS后病程的第一天（第一组）及病情明显好转的第五天（第二组）取支气管肺泡灌洗液，从中提取肺泡巨噬细胞，应用双向凝胶电泳(Two dimensional electrophoresis，2DE)和基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(Matrix-Assisted Laser Desorption/IonizationTime of Flight Mass Spectrometry, MALDI-TOF-MS)技术筛选鉴定出差异蛋白质。 结果：两组AM共发现135个显著不同的点，其中87个点容积的变化＞2.5倍，48个点显示＜2.5倍的变化。进一步通过串联质谱确定差异蛋白质的身份。最终有35个蛋白质得以确认。与第一组相比较，第二组中表达上调的蛋白质点有21个，表达下调的蛋白质点有14个。 结论：脓毒症ARDS患者病程不同时期肺泡巨噬细胞蛋白质存在差异性表达。 第二部分脓毒症ARDS患者病程不同时期肺泡巨噬细胞源性HSP27及S100A9、TNF-a、IL-1ra表达的差异 背景：本研究的第一部分选择了继发于脓毒血症的ARDS患者，在病程不同时期取肺泡巨噬细胞进行蛋白质组学分析，研究肺泡巨噬细胞的蛋白质组学的动态变化，通过串联质谱最终有35个蛋白质得以确认，其中表达上调的蛋白质点有21个，表达下调的蛋白质点有14个。本部分研究选择表达下调的蛋白质之一热休克蛋白27(heatshock protein27，HSP27)以及表达上调的蛋白质S100A9、肿瘤坏死因子-a(Tumor Necrosis Factor-a，TNF-a)、白细胞介素-1受体拮抗剂(Interleukin-1 receptor antagonist，IL-1ra)行Western Blot实验对第一部分结果进行验证。 目的：探讨脓毒症ARDS患者在病程的不同时期HSP27及S100A9、TNF-a、IL-1ra在肺泡巨噬细胞是否有表达及表达是否有差异。 方法：以5个脓毒症ARDS患者为研究对象，分别于ARDS发病的第一天及第五天行支气管肺泡灌洗，从中提取肺泡巨噬细胞，采用Western Blot检测ARDS病程不同时期肺泡巨噬细胞HSP27及S100A9、TNF-a、IL-1ra的差异表达。 结果：TNF-α、IL-1ra、S100A9及HSP27在ARDS患者的肺泡巨噬细胞中均有表达，表达率100％。TNF-α、IL-1ra、S100A9在第二组(ARDS病程第5天)比第一组（ARDS病程第1天）表达明显增强:TNF-α表达相对值分别是day1（0.41±0.03），day5（0.74±0.07）P＜0.05;IL-1ra: day1(0.26±0.04), day5(0.54±0.06)P＜0.05;S100A9表达相对值分别是:day1（0.29±0.02），day5（0.48±0.03）P＜0.05。而HSP27在第二组（ARDS病程第5天）比第一组（ARDS病程第1天）表达明显减弱，表达相对值分别是day1（0.60±0.04），day5(0.35±0.02)，P＜0.05。两组间TNF-α、IL-1ra、S100A9及HSP27表达的差异与经过2-DE分析后的蛋白质组学结果一致。 结论：脓毒症ARDS患者在病程的不同时期HSP27及TNF-α、IL-1ra、S100A9在肺泡巨噬细胞均有差异性表达，且与蛋白质组学结果一致。 第三部分毒症ARDS患者血浆及支气管肺泡灌洗液中TNF-a、IL-1、IL-Ⅰra、IL-10、vWF及RAGE的水平及对ARDS病情发展及预后的评估 背景：ARDS是以突出的肺部损伤、炎症及微血管通透性增加为特征进而导致弥漫性肺水肿和机械性功能障碍，最终导致呼吸衰竭的一种疾患。ARDS患者的主要死因是由于肺损伤引起的系统性炎症所导致的多器官功能衰竭。在本研究的第一部分获得了在ARDS病程不同时期肺泡巨噬细胞差异性表达的蛋白质。在本研究的第二部分，用Western Blot的研究方法证实ARDS患者在病程的不同时期TNF-a及IL-1ra在肺泡巨噬细胞有差异性表达，且与蛋白质组学结果一致。因此在第一、第二部分研究的基础上，本部分研究选择在ARDS患者血浆及肺泡灌洗液中检测TNF-a、IL-1ra及其他炎症介质研究其对ARDS病情发展及预后的预测价值。 目的：探讨ARDS患者血浆及支气管肺泡灌洗液(BALF)中TNF-a、IL-1、IL-1ra、IL-10、晚期糖基化终末产物受体(receptor foradvanced glycation end products,RAGE)、von Villebrand因子(vWF)对ARDS病情发展及预后的预测作用。 方法：研究对象选择脓毒症ARDS患者54例，所有研究对象收住ICU时均处于病情的急性期，并发ARDS24小时以内，在收住ICU病房的第1天6小时内立即收集外周血液标本和肺泡灌洗液(BALF)标本。用酶联免疫吸附试验测定细胞因子TNF-a、IL-1、IL-1ra、IL-10、vWF及RAGE的浓度以研究这些参数对ARDS发展及预后的预测作用。研究对象分为三组:A组(n=20)为中度ARDS患者组;B组(n=17)为轻度ARDS患者组，该组患者在48小时内发展为中度ARDS;C组(n=17)为轻度ARDS患者组，该组患者未发展为中度ARDS。 结果：轻度ARDS患者血浆及灌洗液中TNF-a、IL-1、及RAGE、vWF均是病情进展恶化很好的阴性预测值，其中血浆中以上各指标的阴性预测值为83％-95％，灌洗液中88％-94％。血浆中IL-1及vWF的水平和灌洗液中IL-1的水平与死亡正相关，随着IL-1及vWF的水平增高，死亡风险增高。血浆IL-10、IL-1ra水平与死亡呈负相关，血浆IL-10、IL-1ra水平越高，死亡风险越低。 结论：血浆及肺泡灌洗液中的细胞因子TNF-a、IL-1、IL-1ra、IL-10及RAGE、vWF对脓毒症ARDS患者病情进展及预后有一定的预测作用。