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研究背景和目的：
Epstein-Barr病毒(EBV)与人类多种疾病的发生有关。研究发现某些特定EBV基因型与EBV相关疾病发生有一定关联。根据编码EBV核抗原(nulcearantigen,EBNA)2、3A、3B和3C基因某些区域的序列差异,EBV基因型首先可分为1亚型和2亚型两大亚类。BZLF1基因启动子(promoter zone Zp,位于BZLF1基因序列的位点-221～+12)的序列差异形成的变异株也已成为研究EBV病毒基因型与疾病相关性的一个分支,研究证明某些Zp变异株在不同疾病中的分布存在差异。潜伏膜蛋白(latent membrane protein,LMP)1-C端的序列差异,将LMP1分为30bp缺失型(del-LMP1)和未缺失型。许多研究指出缺失型LMP1与EB病毒相关的恶性肿瘤的发生有一定关系。
在儿童时期非肿瘤性EBV感染相关疾病主要包括传染性单核细胞增多症(infectious mononucleosis,IM)、EBV相关噬血细胞综合症(EBV associatedhemophagocytic lymphohistiocytosis,EBV-HLH)和慢性活动性EBV感染(chronicactive Epstein-Barr virus,CAEBV)。这三种疾病既存在联系又存在差异。EBV1、2亚型、BZLF1基因启动序列(Zp)变异株及缺失型LMP1与这些疾病的关系目前尚无相关报道。本文研究EBV亚型和相关基因的变异株在这些疾病中的分布,探讨不同基因型EBV与这些疾病的联系。
方法
收集从2006年3月年2008年12月首都医科大学附属北京儿童医院就诊患儿的全血DNA标本共206份,其中40份对照组来自EBV急性上呼吸道感染患儿,既往感染EBV,但无EBV感染相关疾病的临床表现,88份来自传染性单核细胞增多症,46份来自EBV相关噬血细胞综合症,32份来自慢性活动性EB病毒感染。对多聚酶链反应法(PCR)扩增Zp序列产物进行直接测序从而对BZLF1基因Zp序列分型,PCR扩增EBNA2和EBNA3C基因,EBV1、2亚型通过电泳其扩增产物判定。采用卡方分析对各变异株分布频率进行统计学分析,P<0.05有统计学意义。选取11份EBV-HLH病人DNA标本,PCR直接扩增LMP1基因全长,与B958标准株比对,区分LMP1缺失型和未缺失型。
结果
1.在所有4组206例患儿中1型EBV为190例,在各个组别中均占大多数(81.3～96.7％),而在4组中,1、2两型分布频率无明显差异(P>0.05).
2.在所有4组病人中共检测出4种Zp变异株:P、V3、V4和在本次试验中新发型的变异株V1。4种变异株在不同组别中分布存在差异,P型在4组中占多数而V3型更多出现在EBV-HLH和CAEBV中,V1型则仅出现在传单病人和对照组中。V3型与CAEBV密切相关(P≤0.01)。此外,两种Zp变异株共存的现象也在一部分样本中出现,称为混合感染,混合感染Zp变异株均以P型混合其他型的形式出现,大多数存在于CAEBV和EBV-HLH中,主要以Zp-P+V3形式存在。
3.对选取的11份EBV-HLH患儿的外周血样本DNA进行LMP1-C端基因全长进行扩增,对扩增产物测序发现,其中10个样本为LMP1缺失型,1份为LMP1未缺失型,在EBV-HLH患者中缺失型LMP1所占比例为90.9％。
结论
我国北方地区儿童EB病毒感染主要以1型多见,BZLF1-Zp变异型在儿童常见EB相关疾病中的分布存在差异,Zp-V3型在CAEBV和EBV-HLH的检出率显著高于IM,提示Zp-V3可能与CAEBV和EBV-HLH的发生有关。EBV-HLH患者中LMP1缺失型的高检出率,提示EBV-HLH的发生与感染LMP1缺失型EBV可能存在一定关系。