【摘 要】
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我们使用无心脏疾病的志愿者提供的心室肌,抽提出肌球蛋白后,进一步纯化出中国人心肌肌球蛋白轻链1(CCMLC1).以此为作抗原,从雄性大耳兔中制备了多克隆抗体.并以CCMLC1进行了
【机 构】
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中国科学院上海生物化学和细胞生物学研究所
【出 处】
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中国科学院上海生物化学研究所 中国科学院上海生物化学和细胞生物学研究所 中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学
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我们使用无心脏疾病的志愿者提供的心室肌,抽提出肌球蛋白后,进一步纯化出中国人心肌肌球蛋白轻链1(CCMLC1).以此为作抗原,从雄性大耳兔中制备了多克隆抗体.并以CCMLC1进行了免疫双扩散鉴定.随后我们克降了中国人心肌肌球蛋白轻链1的基因,报导了中国人心肌肌球蛋白链1cDNA的核苷酸序列,并由此推算的氨基酸序列,与国外发表的人心肌肌球蛋白轻链的氨基酸序列比较.利用表达的中国人心肌肌球蛋白作为抗原,我们制备多克隆抗体和专一的单克隆抗体.用PCR方法,以中国人心肌肌球蛋白轻链1的cDNA为模板,分别获得中国人心肌肌球蛋白轻链1的各为98个氨基酸的N端和C端片段cDNA的克隆并进行了表达.同时进行了其表达产物与大鼠心肌肌球蛋白重链和人心肌肌动蛋白以及单克隆抗体结合的研究,发现三者均和轻链1的N端相结合,结合位点各不相同.将表达的中国人心肌肌球蛋白轻链1、轻链1的N端以及C端的融合蛋白分虽以凝血酶因子Xa处理,去除GST部分后,与大鼠心室肌肌球蛋白B经过胰凝乳蛋白酶处理后的S1部分结合,结DEAE-CelluloseDE-52柱层析后,检测基肌动蛋白依赖的MgATP酶、CaATP酶、以及EDTAATP酶的活力.
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