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本研究对新型鸭瘟病毒(暂定名)的提纯方法,检测新型鸭瘟病毒抗体的间接ELISA方法,对病毒抗原进行定位的间接免疫荧光法,不同继代代次的鸭胚尿囊液对鸭的致病力与抗原检出率的关系进行了研究,确定了病毒抗原的最佳提纯方法,间接ELISA的最佳反应条件和其敏感性、特异性和重复性,对病毒抗原进行了定位,确定了不同代次的病毒对鸭的致病力与抗原检出率的关系。结果表明:以50%饱和度(NH4)2SO4法或10%PEG6000沉淀法粗提,再经Sephadex G-200层析纯化,可获得纯度较高的病毒抗原;间接ELISA方法检测新型鸭瘟血清抗体有很高的敏感性,特异性和重复性;间接免疫荧光法证实病毒含量以鸭的肝、脾最高,其次为血液、脑、鼻腔分泌物;随着继代次数增多,该病毒对鸭的致病力明显减弱,20代后基本不能使鸭发病,但能在鸭体内顺利增殖,对病毒检出率没有影响。本研究共分四部分:第一部分:新型鸭瘟病毒的提纯 从自然发病死亡且有典型症状的病例中分离到一株病毒,接种12日龄番鸭胚传代,收集接种后48h-120h死亡,胚体有典型病变的鸭胚尿囊液,分别以50%饱和度(NH4)2SO4法、60%饱和度(NH4)2SO4法、8%PEG6000沉淀法、10%PEG6000沉淀法粗提鸭胚尿囊液中的病毒,再经Sephadex G-200层析,纯化粗提病毒样品,并控制不同流速。结果表明以50%饱和度(NH4)2SO4法和10%PEG6000沉淀法粗提病毒效果相当,Sephadex G-200层析时控制流速为0.5ml/min时效果较好,大于0.5ml/min很难将病毒与杂蛋白分开,小于0.5ml/min时峰域变宽、拖尾,同样影响分离效果。第二部分:间接ELISA检测新型鸭瘟血清抗体 将纯化病毒作为包被抗原,包被浓度1.17ug/孔,包被后37℃1h转入4℃过夜包被效果较好;封闭后以37℃1h、血清加入后以37℃1h、酶标抗体加入后以37℃1h反应,效果较理想,酶标抗体工作浓度0.25ug/ml。经检测<WP=6>30份阴性血清,表明阴、阳性血清的临界值为0.20,受检血清高于此值判为阳性;检测攻毒雏鸭血清抗体,除发病后1-3天内急性死亡者未检出抗体外,其余检测结果均为阳性,检出率80%;免疫雏鸭可全部检出阳性。经对不同标准阳性血清和自制阳性血清的检测,证明新型鸭瘟阳性血清与鸭瘟阳性血清有部分相关性,与其它非相关性阳性血清不存在交叉反应。对6份血清在不同时间相同条件下检测3次,判定结果完全相同。以上研究表明该方法具有很高的敏感性、特异性和重复性。第三部分:间接免疫荧光法对病毒抗原进行定位 分别用NDPV、DPV对10日龄和50日龄鸭攻毒,人工复制病例,于攻毒后不同时间采集病料,作冰冻切片和组织压印片,IFA法检测病毒抗原。结果表明NDPV对雏鸭致病力较强,DPV易使成鸭致病;雏鸭攻毒NDPV后最佳采样时间为攻毒后72h,攻毒DPV后48h采样为宜。经对不同病料检测,表明NDPV和DPV在不同品种、不同日龄的鸭体内增殖部位基本相同,即肝、脾含量最高,其次为血液,再者为脑、鼻腔分泌物。各脏器的冰冻切片检出率明显高于压印片。第四部分:不同代次的病毒液对鸭的致病力与抗原检出率的关系 分别用第2、5、10、15、20、25代鸭胚尿囊液攻毒1日龄雏番鸭,攻毒量0.5ml/只,每组5只。结果表明,随着继代次数增多,该病毒对雏鸭的致病力明显减弱,第2、5、10代病毒液可使全部雏鸭发病致死,第15、20代病毒液只能使雏鸭有轻微发病症状,第25代病毒液攻毒后雏鸭表现正常。每组雏鸭都采集病料用IFA法检测病毒,结果证明,不同代次的病毒都能在雏鸭体内增殖,且增殖部位相同,病毒检出率基本相同。