动脉粥样硬化模型兔中USPIO标记DC移植的MRI示踪

• 作 者: 杨馥源
• 机 构: 华南师范大学
• 出 处: 华南师范大学
• 发表日期: 2012年期
• 关键词: 树突状细胞 动脉粥样硬化 动物模型 核磁共振成像 USPIO标记 DC移植

背景：树突状细胞(DC)作为最强大的抗原呈递细胞，在免疫反应中处于中心枢纽地位，同时在动脉粥样硬化斑块形成和发展的过程起到促进作用，但是具体的作用机理尚未阐明，DC的移植对于癌症等众多疾病的治疗、免疫耐受的诱导中起关键作用。核磁共振(MRI)有较高的分辨率，对人体伤害小，良好的MRI活体示踪方法可以提供DC在体内的迁移、归巢情况，在DC相关的移植使用和细胞机理、疾病病理研究中具有重要意义。　　目的：研究超小顺磁性氧化铁(USPIO)标记DC的适宜浓度，在动脉粥样硬化模型兔中结合MRI进行移植DC的示踪。　　方法：密度梯度离心法分离结合集落刺激因子(GM-CSF)、白细胞介素4(IL-4)诱导培养兔外周血来源的DC，流式细胞仪检测细胞表面特异性抗原表达情况鉴定是否成熟；使用台盼蓝染色、CellCountingkit-8(cck-8)测定不同浓度USPIO标记对DC活性的影响，初步探讨USPIO相关的DC凋亡机理；原子吸收光谱法分析USPIO标记后细胞内的铁含量，进行琼脂糖为载体的细胞多序列体外MRI；免疫损伤结合高脂喂食12周建立兔动脉粥样硬化模型，检测血液生化指标评估模型建立情况；将体外诱导培养9天的DC用2ml磷酸缓冲液(PBS)悬浮后经USPIO标记24小时后耳缘静脉注射到模型兔体内，同时设空白对照组和模型对照组，移植后24小时做多序列MRI活体成像，一周后石蜡切片普鲁士蓝染色追踪细胞去向。　　结果：标记高浓度USPIO(>500μg/ml)标记会引起DC膜电位下降和活性氧释放，进而启动细胞凋亡程序，200μg/mlUSPIO标记效率较高且能够保证细胞状态，标记后细胞内铁含量上升，可以在MRIT1WI、T2WI序列扫描中产生负信号。经过12周高脂喂食后兔腹主动脉内膜增厚严重，呈典型动脉粥样硬化特征，USPIO标记DC移植后的动脉粥样硬化模型兔腹主动脉MRI多个序列成像与模型对照组具有差异，通过对T2加权压脂成像(fsT2WI)和T2加权成像(T2WI)序列成像的对比分析可以确定移植后24hDC存在于模型兔腹主动脉斑块处，一周后在脾脏中发现含铁颗粒的细胞。　　结论：DC的USPIO标记适宜浓度为200μg/ml；使用USPIO标记结合MRI成像可以在24h内活体追踪DC细胞在动脉粥样硬化模型兔体内的迁移情况。