三叶木通SSR引物开发与遗传分析

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三叶木通是木通科木通属植物,种下划分为三叶木通(Akebia trifoliata ssp.trifoliata)、白木通(Akebia trifoliata ssp.australis)、长萼三叶木通(Akebia trifliata ssp.longisepala)3亚种。三叶木通具有极高的药用、经济和生态价值,存在巨大的开发潜力,应用前景广泛。但目前其种质资源状况仍不清晰,阻碍了三叶木通的开发利用。本研究以三叶木通为研究对象,开发出适合三叶木通系统学研究的SSR引物,为其种质资源的研究打下基础。此外,利用这些共显性的高多态性位点探讨三叶木通的遗传关系和遗传结构状况。本课题研究获得主要结果如下:1)利用磁珠富集法建立三叶木通微卫星文库,检测的150个菌落中获得了 148个阳性克隆菌落,分析测序结果得出:共有57条序列可以设计引物,占总比例38%,共设计引物63对。2)利用正交试验设计对设计的63对引物进行反应体系优化,共54对引物获得了目的片段。对54对引物用7个样本进行初次筛选,得到33对具有多态性的引物。然后分别用54和48个样本对33对引物进行再次筛选,共得到16对条带清晰的高多态性引物。3)利用开发出的16对SSR引物对三代个体间的遗传多样性分析发现,这些位点在群体间遗传多样性较高,可为三叶木通的种质资源和遗传多样性研究提供有效的工具和手段。此外,群体的杂合度较高。4)通过对三代个体间的聚类分析和遗传结构分析发现,三叶木通是一个杂合度较高的异交种,可为栽培育种提供指导。
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