论文部分内容阅读
大豆是重要的作物,而遗传转化是培育突破性的大豆新品种的先进方法。到目前为止,国内外已经建立起了多种大豆遗传转化受体系统,也得到了一些遗传转化的大豆植株,但总体的工作效率还很低。本文介绍了通过技术创新优化了大豆遗传转化体系以及应用这些创新的方法获得了转基因的植株的过程和结果。 在优化大豆胚轴外植体子叶腋芽增殖系统的过程中发现,质量最好的胚轴外植体来自在12 h/d的光照条件下培养4 d的大豆幼苗;在种子萌发培养基中添加BA不利于子叶腋芽的增殖,而种子的接种定位的不同则对种子萌发质量没有大的影响;制备外植体以保留子叶腋芽,在齐靠幼苗子叶内侧下端进行切割为最合适;采用稍高浓度的BA溶液浸泡胚轴外植体上端是最有利于子叶腋芽增殖的处理方式,采用不添加活性炭和抗生素的培养基有利于胚轴外植体生根。 在优化大豆下胚轴再生系统的过程中发现,种子萌发培养基中添加BA同样不利于下胚轴外植体的不定芽再生;以在外侧齐靠幼苗子叶基部切割,刚好去除了子叶腋芽的下胚轴外植体的再生能力最强;采用30 mg/L BA溶液浸泡下胚轴外植体上端20min是最有效的促进再生的方法;添加32-64 g/L蔗糖的MSB5培养基对下胚轴外植体再生最为有利;相对于其他品种,华春2号的再生效果最佳。 在优化大豆遗传转化体系的过程中发现,种子萌发培养基中添加BA不利于所获得的胚轴外植体在农杆菌侵染处理后的芽体增殖;转化时,先用BA溶液对外植体进行处理和1 d的预培养,再采用局部侵染的方式对胚轴外植体的上端进行农杆菌侵染,然后进行3 d黑暗条件下的共培养可确保转化效果;外植体恢复培养以直接竖插的方式接种至添加50-100 g/L蔗糖的培养基上培养30 d为适宜;对转化体进行筛选培养时,宜保留外植体上的一部分胚轴,培养方式以横放于培养基表面为合适;草胺磷作为筛选剂,筛选压以3 mg/L为宜;基因型对转化效果有影响,以华春2号的表现相对较好,可优先作为遗传转化的实验材料品种。 在建立大豆微嫁接体系的过程中发现,获取砧木的种子萌发培养基中不宜添加BA,合适的萌发培养时间为5 d,以保留完整胚根的下胚轴砧木的嫁接效果最好;顶芽和芽条均可作为接穗,不需要对接穗进行任何处理就可得到很好的嫁接效果。在嫁接方式方面,相对于插接法,劈接法的适用范围较广;接穗嫁接后以竖插的方式进行培养为最合适;最适宜于嫁接苗的培养的培养基为添加50 g/L蔗糖但不添加NAA和抗生素的MS培养基。 应用以上建立的创新性技术进行大豆转化ALO基因的实验,获得了经PCR检测证实带有目的基因和标记基因的植株。