我国香菇主栽品种分子图谱库的构建

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香菇(Lentinula edodes)是一种重要的食用菌,我国香菇产量占全世界的70%左右。同时我国菌种混乱,同物异名、同名异物现象严重,为了加大食用菌菌种的管理,近些年国家出台了一系列的菌种保护和菌种真实性鉴定法规和标准,在鉴定工作中,鉴定任何一个样本,需要将全部已有品种做参照样本才能进行,导致新品种的遗传特异性鉴定工作量越来越大。本文以通过国家认定的25个香菇品种为材料,应用SSR分子标记进行遗传学分析,以探究SSR技术在香菇品种认定中遗传特异性鉴定的可用性,同时建立现有主栽香菇品种遗传特异性分子指纹图谱,力求为香菇品种认定和良种使用奠定分子生物学基础,同时为其他食用菌的认定工作提供方法和标准。实验结果如下:1.本研究从自行设计的36对引物和来自于文献的12对引物,总共48对引物中筛选到了14对具有多态性的SSR引物,其中自行设计的引物10对,来自于文献中的引物4对。2.以通过认定的25个香菇(Lentinula edodes)品种为材料,使用筛选到的14对引物进行SSR分析,引物的多态性为100%,每对引物产生的等位基因数为2-9个,平均5.0个,基因型数为2-12个,平均6.3个。3.选取庆元9015和它的四个单孢菌株:809(A1B2)、810(A2B1)、811(A2B2)、812(A1B1)作为实验材料,随机选取Paa-1和F7这两对引物进行SSR分析。最终结果证明,对于香菇来说,SSR分子标记也是共显性标记,同植物和动物以及其他的微生物一样。4.对SSR结果进行遗传学参数分析,表观杂合度为0.0400-0.9200,平均表观杂合度为0.4857;预期杂合度为0.1151-0.8131,平均预期杂合度为0.6126;PIC值为0.1064-0.7736,平均PIC为0.5541。综合分析表明除了S4和S15引物的区分度较差,其他12对引物区分度较高,同时14对引物综合使用能表现出很高的区分度。5.根据条带信息,使用POPGENE ver.1.32软件计算25个香菇供试菌株之间的遗传距离,结果表明,申香10号和申香12号之间的遗传距离最小,为0.0000;香九和L9319之间的遗传距离最大,为2.3885;25个供试菌株之间的平均遗传距离为0.6407。25个品种中,除申香10号和申香12号不能区分外,对其他23个品种清晰鉴别。最终利用14对引物的扩增图谱构建了我国香菇已通过认定的栽培菌株的指纹图谱,本图谱可以成为重复性良好、试验室间可比对的香菇栽培品种标准指纹图谱,在品种认定工作的特异性鉴定中不再需要对已认定所有品种做参照,较RAPD、ISSR等鉴定方法工作量大大减少。
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