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目的：检测中国汉族人家族性慢性良性天疱疮家系的ATP2C1基因的致病性突变,对家系中未到发病年龄的第三代家庭成员进行先于临床诊断的基因学诊断,力图为家族性慢性良性天疱疮的分子生物学诊断提供尝试性的实验研究。回顾分析了以往世界上报道过的所有ATP2C1基因的突变,试图发现位于hSPCA1蛋白不同功能区的突变位点与不同临床表型之间的关系,为基因型与表型关系的研究提供新的思路。
方法：收集了一个中国汉族人HHD家系及其家庭成员的外周血标本,提取全基因组DNA,设计覆盖ATP2C1基因所有外显子编码区的二十六对引物,采用PCR反应扩增所有外显子编码区及其侧翼序列,通过对PCR反应产物直接测序进行序列分析。利用Primer Premier5.0软件寻找合适的限制性内切酶,对目的片断的PCR产物进行酶切分析,确定基因序列。根据对家系中确诊患者和正常对照者基因组DNA直接测序及限制性内切酶消化结果,对临床待诊者进行分子水平的诊断。通过医学数据光盘CBM及美国国立生物技术信息中心数据库检索报道过的ATP2C1基因突变的相关资料,总结它们的临床特点和突变筛查结果,分析位于hSPCA1蛋白不同功能区的突变位点与临床表现之间的关系。
结果：检测出了一个新的ATP2C1基因的错义突变(c.1004T→C),该突变在相对应的家系患者中都存在,而在正常个体及120例无关正常对照中不存在这样的突变,证明了这个突变是致病性突变而非正常多态性。发现了先证者的女儿具有与该家系所有患者相同的ATP2C1基因突变位点,对此人做出了先于临床发病的基因学诊断。但是未能发现基因型与表型的相关性。
结论：研究结果提示这个新的ATP2C1基因错义突变与中国汉族人HHD的发病有关,从理论上再一次证明了家族性慢性良性天疱疮的发病不存在遗传异质性,同时为突变数据库增加了ATP2C1基因的新的突变位点。尝试性地实现了对于家族性慢性良性天疱疮的基因学诊断,为今后开展对该病分子水平的遗传咨询和产前诊断提供了实验性例证。对以往世界上报道过的所有ATP2C1基因突变位点与其所对应的hSPCA1蛋白功能区关系的探讨结果显示,基因型和表犁之间无明显的相关性。